用于核酸配对末端测序的方法、组合物、系统、仪器和试剂盒

摘要

在一些实施方案中，本教导提供用于配对末端测序的方法。在一些实施方案中，待经历配对末端测序的多核苷酸模板包含至少一个交联部分和至少一个易切断部分。在一些实施方案中，配对末端测序反应包括(a)正向测序步骤，(b)切割步骤，和(c)反向测序步骤。在一些实施方案中，配对末端测序反应包括(a)正向测序步骤，(b)交联步骤，(c)切割步骤，和(d)反向测序步骤。

主权项

用于配对末端测序的方法，其包括：(a)在附着至表面并且具有至少一个可切割的易切断部分的模板多核苷酸上进行正向测序反应，所述正向测序反应通过(i)将第一引物杂交至所述模板多核苷酸，(ii)通过利用聚合酶催化的连续核苷酸掺入进行引物延伸反应来延伸所述第一引物并形成杂交至所述模板多核苷酸的第一延伸链，和(iii)鉴定所述第一延伸链中所掺入的核苷酸来进行；(b)通过将所述易切断部分与热、辐照、至少一种化学品或至少一种酶进行反应来切割所述模板多核苷酸，以形成截短截短的模板多核苷酸并任选地形成末端3’磷酸基团，和任选地将所述末端3’磷酸基团转化成‑OH基团，和任选地去除被切割的模板多核苷酸的部分；和(c)在所述第一延伸链上进行反向测序反应，所述反向测序反应通过利用使用聚合酶催化的连续核苷酸掺入的引物延伸反应来延伸所述截短截短的模板多核苷酸上的末端3’OH基团并形成第二延伸链，和(iii)鉴定所述第二延伸链中所掺入的核苷酸来进行。