净化双氟沙星和磺胺类药物复合免疫亲和柱及其制备方法与应用

摘要

本发明涉及一种净化双氟沙星和磺胺类药物复合免疫亲和柱及其制备方法与应用。本方法应用双氟沙星抗原，免疫小鼠，筛选出分泌双氟沙星抗体的杂交瘤细胞9205，制备出单克隆抗体。采用4％的柱状琼脂糖凝胶作为固相载体，琼脂糖凝胶与抗双氟沙星单克隆抗体和市场上购买的抗磺胺类药物抗体偶联形成免疫吸附剂，装柱制成免疫亲和柱(IAC)。当含有双氟沙星和磺胺类药物的样品通过IAC时，免疫吸附剂就会特异性的吸附双氟沙星和磺胺类药物，其他的杂质则流出IAC柱，然后用甲醇将双氟沙星和磺胺类从柱子中洗脱下来，样品得到了很好的净化。建立免疫亲和柱净化-液相色谱法检测双氟沙星和磺胺类药物。

主权项

净化双氟沙星和磺胺类药物复合免疫亲和柱，其特征在于，由如下方法制备：a基质制备每1g琼脂糖凝胶基质粉末溶于1mmol/L HCl中，然后使用1mmol/L HCl洗涤15min；b抗体偶联使用偶联缓冲液0.2mol/L NaHCO₃pH8.3溶解待偶联的抗双氟沙星单克隆抗体和磺胺类药物单克隆抗体，得到抗体溶液，迅速将步骤a活化后的琼脂糖凝胶基质转移到抗体溶液中；室温条件下，充分混匀上述的混和物2‑4h；c配体封闭将步骤b处理后的基质转移至0.1mol/L Tris‑HCl缓冲液中，室温条件下静置2‑4h；d除去偶联后未偶联上的多余的配体依次用0.1mol/L醋酸/醋酸钠缓冲液和0.1mol/L Tris‑HCl缓冲液对经步骤c处理后的基质进行洗涤，至少洗涤3个循环；e装柱用5倍所述琼脂糖凝胶体积的0.01％NaN₃‑PBS洗涤，并使用0.01％NaN₃‑PBS保存，然后装柱。