立体化培养细胞在骨科药物筛选中的应用

摘要

为了模拟人体内环境的细胞培养基质快速应用于骨科药物筛选，本发明提供一种立体培养基质，通过转瓶培养获得大量人骨髓间充质干细胞、立体基质配制、立体基质进行交联、加入药物进行立体化培养、检测筛选各种药物的方法达到药物快速筛选目地。通过立体化细胞培养能获得不同药物浓度下细胞生长状态，为后期临床提供大量实验数据，更快速判断药物的有效性和毒性。药物筛选过程中更易防治病菌污染，能长时间观察细胞生长状态和细胞反应，为后期药物治疗时的副作用提供数据支持。

主权项

本发明提供立体化培养细胞在骨科药物筛选中的应用，其具体步骤包括：(1)转瓶培养获得大量细胞：采用干细胞常规培养方法获得含大量人骨髓间充质干细胞的培养液，经800～1000rpm低速离心5‑10min得人骨髓间充质干细胞；(2)立体基质配制和交联：取步骤(1)所获得的人骨髓间充质干细胞10mL放入300mL培养瓶中，再加入100mL的1.2％巯基化透明质酸水溶液，搅拌5‑10min后再加入50mL的15％高分子量聚乙二醇二丙烯酸酯水溶液，进行均匀混合后立即倒入6孔板中，28‑32℃静置12‑20min，得含有人骨髓间充质干细胞的立体化培养介质；(3)与药物立体化共培养：向6孔板中加入含不同浓度药物的细胞培养液，在37℃的CO₂培养箱中培养；(4)镜检观察细胞状态：与不同浓度的药物培养时，每隔2h后直接将培养的6孔板放入倒置显微镜中观察，确定各种药物在不同浓度下细胞生长状态；(5)筛选药物体系建立：根据显微镜观察的细胞生长状态确定各种药物的浓度，取200mL的1.2％巯基化透明质酸水溶液放入500mL培养瓶中，加入步骤(1)所获得的干细胞10mL，搅拌混合5‑10min，100mL的15％高分子量聚乙二醇二丙烯酸酯水溶液，进行均匀混合后立即倒入96孔板中，30℃静置15min，向96孔板中加入各种药物在37℃的CO₂培养箱中培养，每隔2h后直接将培养的96孔板放入倒置显微镜中观察，快速筛选各种药物的有效性和毒性。