关节镜冲洗液来源间充质干细胞在再生修复中应用

摘要

关节镜冲洗液来源间充质干细胞在再生修复中应用，取经关节镜手术获得大量来自关节各组织(软骨组织、滑膜、滑液)的间充质干细胞液，采用分段收集、膜过滤等程序，富集其中细胞成分进行培养与扩增；富集的细胞经过贴壁生长、增殖、分化以及外源微生物污染检测等程序后，参照国际ISCT推荐的间充质干细胞标准对富集的干细胞纯度和均一性的鉴定分析，最后分别储存于主细胞库与工作细胞库用于细胞治疗。本发明充分利用了关节镜手术后的废弃液，分离出干细胞用于患者治疗。

主权项

本发明提供关节镜冲洗液来源间充质干细胞在再生修复中应用，步骤包括：(1)关节液收集：用无菌的收集管对关节镜手术过程中冲洗液进行分段收集冲洗液，保存备用；(2)干细胞分离制备：将分段收集冲洗液通过陶瓷膜过滤，进行细胞富集，所得细胞分别加入培养液后重新悬浮，按3×10⁵/ml浓度接种到培养瓶及事先放置有消毒盖玻片的12孔板中传代培养，培养液为含15％FBS的L‑DMEM培养液，培养5～7d去除未贴壁的细胞后，获得贴壁细胞；(3)合格供体材料档案：参照国际间充质干细胞标准对贴壁细胞进行纯度和均一性的鉴定分析，确定合格的间充质干细胞，建立相关档案，同时对合格的干细胞进行传代，4～5d传代一次；(4)间充质干细胞的成软骨分化：将培养传代3次以上的干细胞，制成浓度为4×10⁵/ml的悬液，取1ml细胞悬液于15m1塑料离心管中，500g离心15min，使其形成细胞微团，小心吸去培养液，加入2ml无血清软骨诱导培养液，然后置于二氧化碳培养箱中培养，4天后首次换液，以后隔2天换液，在培养21天后取出培养的细胞团，检测成软骨分化效果；(5)植入再生修复效果：将合格的间充质干细胞按一定浓度植入患者关节处，观察关节再生修复效果。