小木漆高效快速扩繁方法

摘要

本发明涉及植物组培方法，尤其是小木漆的组培方法。具体来说是一种小木漆高效快速扩繁方法，包括（1）外植体的选择与消毒（2）启动培养（3）增殖培养（4）生根培养（5）炼苗与移栽步骤，本发明具有遗传性状稳定、培养过程简单、易生根，培养扩繁周期短，移栽容易成活的优点。采用对优良小木漆优良单株进行组织培养的方法，可使其繁殖系数达到4-5倍，每10个有效小木漆腋芽，按繁殖系数为4.5，增殖周期为45天计算，除去污染损耗，其年繁殖量仍将达到175万个以上，有效解决了小木漆快速繁殖的问题，使得优良无性系材料能够大面积推广，同时也为工厂化育苗奠定了基础。

主权项

一种小木漆高效快速扩繁方法，其特征在于按下列步骤实施：（1）外植体的选择与消毒：选取优良小木漆单株的当年生嫩茎或根萌幼苗，去除叶柄和叶片，用毛刷轻刷茎段表面，除去表面杂质，用2%的洗洁精水溶液浸泡10‑15分钟，在线状自来水下冲洗1‑2小时，剪成3‑4cm长含1‑2个叶腋的茎段，放于灭过菌的外植体缸内，移至超净工作台内进行消毒，75%乙醇浸泡20‑30秒，1%的苯扎氯胺溶液浸泡1‑2分钟，无菌蒸馏水冲洗2‑3次后，用0.1%升汞浸泡10‑20分钟，无菌蒸馏水冲洗5‑8次，放于灭过菌的垫有滤纸的接种盘内，使滤纸能够吸干外植体表面的残留水分；（2）启动培养：将茎段两端分别切去2‑4mm，平放在启动培养基上，叶腋朝上，启动培养基的配方为：White + 6‑BA 0.5‑2mg/L + NAA 0.02‑0.5mg/L，20‑30g/L蔗糖，4.0‑5.0g/L琼脂，pH为5.8‑6.0；置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下暗培养15‑20天后，叶腋处长出1‑2cm高腋芽，再置于光照强度1000‑2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10‑15天；（3）增殖培养：待腋芽长到3‑4cm高时，将其从老茎上剪下，去掉底部1‑2个叶片，直立于幼苗增殖培养基上，对于较高腋芽，从基部切取含1‑2个腋芽的茎段，并平放于增殖培养基上，增殖培养基的配方为：MS + ZT0.1‑1.0mg/L + 6‑BA0.5‑3.0mg/L + TDZ0.1mg/L，20‑30g/L蔗糖，4.0‑5.0g/L琼脂，pH为5.8‑6.0；置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下暗培养15‑20天后，腋芽基部形成约1cm³ 的愈伤组织，茎段叶腋处长出1‑2cm高腋芽，形态学下端也形成约1cm³的愈伤组织，再置于光照强度1000‑2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10‑15天；基部愈伤组织可诱导出4‑8个1‑2cm高的不定芽，同时腋芽长到3‑4cm；待15天后，待不定芽小苗长到3‑4cm高，再将小苗切下，转到相同的增殖培养基上，经过45天的培养，诱导出的小苗又可长到3‑4cm，反复将高3‑4cm的小苗切下进行增殖培养，可以使小木漆进行快速大量的扩繁，其增殖倍数为4‑5倍；（4）生根培养：将3‑4cm高的组培苗转接到生根培养基上，生根培养基配方为：1/2MS + IAA0.05‑0.2mg/L + IBA0.05‑0.2mg/L，0.1‑0.5g/L活性炭，20‑30g/L蔗糖，4.0‑5.0g/L琼脂，pH为5.8‑6.0；置于光照强度1000‑2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10‑15天后，得到小木漆生根苗；（5）炼苗与移栽：待生根苗的根长达1.5‑2cm后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，炼苗2‑4天后，取出生根苗，洗净沾附在根部的培养基，之后移栽到基质配比为腐殖土：河沙=1：1的沙盘中，移栽后注意控制温室内的温度在25‑30℃之间，湿度在75‑80%之间，10‑15天后成活，移至袋口直径为10cm的营养袋中，移栽基质配比同沙盘；再通过养护2‑3个月，苗高达20‑30cm时，移至室外空地造林，以待割取生漆。