纳米氧化铜为催化剂的流动注射化学发光测定胆固醇的方法

摘要

本发明公开一种纳米氧化铜为催化剂的流动注射化学发光测定胆固醇的方法，包括如下步骤：将胆固醇、胆固醇氧化酶和磷酸盐缓冲溶液混合温浴后成反应液，将反应液稀释后，经蠕动泵运输进入混合器中与纳米氧化铜胶体溶液混合，而后与鲁米诺溶液混合，三者混合后进入流动池反应，产生的化学发光强度经光电倍增管检测以测定胆固醇。利用胆固醇氧化酶催化胆固醇氧化产生过氧化氢，结合流动注射技术，增强胆固醇测定中的化学发光信号，增强倍数约为600，利用胆固醇-胆固醇氧化酶-鲁米诺-纳米氧化铜流动注射化学发光法对胆固醇含量进行测定，线性范围为0.625~12.5 umol/L。可应用于食品中胆固醇含量测定以及血清中游离胆固醇与总胆固醇的测定。

主权项

一种纳米氧化铜作为催化剂的流动注射化学发光测定奶粉中胆固醇的方法，由以下步骤组成：奶粉溶解于KOH/乙醇溶液中，水浴皂化，加入水和正己烷漩涡混匀，离心获得正己烷提取物；取正己烷提取物用氮气吹干，用体积比为18:7的异丙醇和Triton X‑100混合溶剂重新溶解已吹干的正己烷提取物作为样品溶液；在EP管中分别加入上述的样品溶液、胆固醇氧化酶和磷酸盐缓冲溶液，所形成的混合液温浴形成反应液，将此反应液稀释，经蠕动泵运输进入混合器中与纳米氧化铜胶体溶液混合，而后与鲁米诺溶液混合，三者混合后进入流动池反应，产生的化学发光强度经光电倍增管检测以测定奶粉中胆固醇；所述的纳米氧化铜由下述方法制备而成：（1）取0.02 mol/L的硝酸铜溶液150 ml和0.5 ml冰醋酸加入到装有冷凝管的三颈瓶中，搅拌加热至沸腾；（2）快速加入0.04 g/ml的氢氧化钠溶液10 ml，加完后，继续搅拌5分钟，得到黑色氧化铜沉淀；（3）将反应得到的黑色氧化铜沉淀离心，用无水乙醇洗涤三次，减压干燥，即得直径为6 nm的纳米氧化铜粉体；所述的流动注射化学发光方法中鲁米诺溶液pH值为11.5；鲁米诺溶液浓度为0.2 mmol/L；纳米氧化铜溶液浓度为1.0 mg/L；所述的奶粉为2.0 g溶解于10 ml 8.9 mol/ L的KOH/乙醇溶液中，所述的KOH/乙醇溶液是指5.0 g KOH溶解于10 ml 无水乙醇形成的溶液，50 ℃水浴皂化1小时，加入10 ml水和20 ml 正己烷漩涡混匀，然后5000 rpm离心5分钟获得正己烷提取物；取上述的正己烷提取物氮气吹干，用体积比为18:7的异丙醇和Triton X‑100混合溶剂重新溶解上述吹干的正己烷提取物作为样品溶液，在EP管中分别加入上述的样品溶液62.5 μl、27.7 U/ml胆固醇氧化酶25 μl和10 mmol/L 、pH 6.5的磷酸盐缓冲溶液162.5 μl，所形成的混合液37 ℃温浴10分钟形成反应液，将此反应液稀释100倍，经蠕动泵运输进入混合器中与1.0 mg/L纳米氧化铜胶体溶液混合，而后与0.2 mmol/L、pH 11.5的鲁米诺溶液混合，三者混合后进入流动池反应，产生的化学发光强度经光电倍增管检测以测定奶粉中胆固醇。