一种以金钱松叶片为外植体的金钱松植株再生方法

摘要

本发明公开了一种以金钱松叶片为外植体的金钱松植株再生方法，该方法通过诱导金钱松叶片产生愈伤组织，再将愈伤组织进行芽分化培养、生根培养和炼苗与移栽等步骤，最终获得了生长速度快、不带任何病虫害和具有优良性状的金钱松组培苗，为金钱松植株的大规模快速繁殖提供了一条新途径，有效地解决当前金钱松药材资源短缺的问题。

主权项

一种以金钱松叶片为外植体的金钱松植株再生方法，其特征在于包括如下步骤：(1)外植体的选取和消毒：选取生长健康、无病虫害的金钱松叶片，先用浓度为75％的酒精消毒10～30s，用无菌水冲洗后，再用浓度为0.1％的升汞消毒3～6min，最后用无菌水冲洗后用已灭菌的滤纸吸干表面的水分；(2)外植体的处理：将消毒后的叶片放在滤纸上，用刀切伤金钱松叶片，伤口以不切断叶片为准；(3)愈伤组织的诱导培养：将处理后的金钱松叶片接入愈伤组织诱导培养基GD+NAA0.5～1.5mg/L+GA₃ 0.5～1.5mg/L中进行愈伤组织的诱导培养；(4)芽分化培养：选取质地较紧密、生长状况良好的愈伤组织，接入芽分化培养基MS+TDZ0.1～0.3mg/L+Ad 10～30mg/L中进行不定芽的诱导培养；(5)生根培养：当不定芽长至1.0～2.5cm时，将其切下转接到生根培养基1/3MS+IAA0.5～1.5mg/L+活性炭20～40mg/L中进行生根培养；(6)炼苗和移栽：当组培苗不定根生长健壮时，打开瓶盖，在室内炼苗2～4天后，将其从培养瓶中取出，洗去不定根上的培养基，将其移栽至松软的土壤中生长；上述所有培养基的pH值5.5～6.7、蔗糖15～50g·L^‑1、琼脂4.0～6.0g·L^‑1；培养条件为：每天光照12～24小时、光照强度为2000～3000lx、培养温度20～30℃。