一种检测朊病毒蛋白(PrP^SC)的方法和试剂盒

摘要

本发明公开了一种灵敏特异的朊病毒蛋白(PrP^SC)检测方法与检测试剂，其技术要点在于：将蛋白酶处理后的样本流经偶联能与朊病毒蛋白（PrP^SC）特异识别并结合的重组G5P蛋白的Ni⁺-NTA树脂，洗涤后经洗脱缓冲液洗脱并收集，洗脱液所含的朊病毒蛋白（PrP^SC）通过其特异抗体进行免疫印迹检测或电泳后染色可被检测。该方法结合了PrPSC蛋白酶抗性和与G5P高亲和特性，有效消除正常PrP所致的假阳性，特异性强；蛋白纯化效果好，抗体免疫检测灵敏度高；该方法具有广泛的应用前景和价值。该方法的建立对朊病毒的研究、疾病的诊断和控制有着重要的意义。

主权项

一种检测朊病毒蛋白PrP^SC的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：将待测样本经10μM蛋白酶K消化，使样本中正常的PrP被水解，而PrP^SC因其蛋白酶抗性不被水解，以消除正常PrP的影响；步骤二：将步骤一处理后的待测样本流经饱和偶联能与朊病毒蛋白PrP^SC特异识别并结合的重组G5P蛋白的Ni⁺‑NTA树脂，利用该重组G5P蛋白捕获待测样本中的朊病毒蛋白PrP^SC，所述的能与朊病毒蛋白PrP^SC特异识别并结合的重组G5P蛋白是由序列表中序列1基因编码表达的；步骤三：用洗脱缓冲液对经过步骤二后的饱和偶联能与朊病毒蛋白PrP^SC特异识别并结合的重组G5P蛋白的Ni⁺‑NTA树脂进行洗脱，收集洗脱液，所述的洗脱缓冲液的组成及浓度为：20mmol/L Tris‑Cl，150mmol/L NaCl，500mmol/L咪唑，pH为7.0；步骤四：用以下方法检测步骤三收集到的洗脱液中的朊病毒蛋白PrP^SC：(a)洗脱的PrP^SC为不溶性蛋白，量多则可见白色沉淀；或(b)洗脱后凝胶电泳经考马斯亮蓝染色出现明显条带即为PrP^SC；或(c)利用PrP^SC单克隆抗体进行PrP^SC的Western blot检测。