一种三磷酸腺苷(ATP)的生产方法

摘要

一种三磷酸腺苷(ATP)的生产方法，它主要包括以下步骤：啤酒酵母的冷冻处理、发酵提转化酶、板框压滤、微滤、发酵合成三磷酸腺苷、纳滤除盐、树脂吸附、树脂洗涤洗脱、超滤除蛋白和热源、乙醇沉淀、干燥等；由于本发明采用了高效节能的膜分离技术，在发酵提转化酶步骤后，通过微滤处理提高转化酶的纯度，从而提高了三磷酸腺苷的合成转化率；在三磷酸腺苷发酵合成液的分离提纯过程中采用纳滤工艺将合成过程中添加的无机盐类营养物质去除，增强了离子交换树脂吸附ATP的容量；采用超滤去除蛋白和热源，提高产品的纯度；本发明具有能提高ATP产品的生产能力、回收率、产品纯度，降低化学试剂的消耗，简化生产工艺，减少污染排放，等特点。

主权项

一种三磷酸腺苷(ATP)的生产方法，它主要是利用酵母细胞内的酶系统，以葡萄糖为能源经糖酵解途径使腺苷(AR)磷酸化合成三磷酸腺苷，其特征在于所述的生产方法包括如下步骤：a）发酵反应锅中加去离子水，将水的温度升到30～42℃，定量投加啤酒酵母，再定量投加葡萄糖、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾溶液，调节pH值在6.0～7.0范围内，保持温度为30～42℃并发酵2.0～2.5小时提转化酶，得到发酵提酶液；上述各反应物的用量为：啤酒酵母泥250～280g/L， 葡萄糖35～45 g/L，磷酸氢二钾25～30 g/L，磷酸二氢钾20～25 g/L；b）发酵提酶液需经过板框过滤去除酶液中颗粒度较大的酵母泥杂质，得到粗滤提酶液；c）经过板框过滤的粗滤提酶液再经过精度为0.1～10μm的微滤膜处理，进一步去除细微的酵母等杂质，得到清酶液；d）在清酶液中加入反应物腺苷20～40g/L，再加入营养物质硫酸镁1.6～2.0g/L，调节pH值在6.0～7.0范围内，并在温度为32～35℃条件下发酵4.0～6.0小时，腺苷由葡萄糖提供能量，在转化酶的催化作用下，腺苷磷酸化为三磷酸腺苷，三磷酸腺的浓度为36～72g/L；立即加冰水冷却，将温度降低到15～20℃；e）采用截留分子量为150～500的纳滤膜，通过纳滤膜的选择透过性能使单价的离子透过膜，三磷酸腺苷溶液中80%以上的无机盐被去除，三磷酸腺苷因分子较大被纳滤膜截留在浓缩液中，得到三磷酸腺苷浓缩液；f）经过去除无机盐的三磷酸腺苷浓缩液用去离子水稀释，使三磷酸腺苷的浓度调整到0.5～1.5%；g）上述稀释后的三磷酸腺苷溶液通过201×7阴离子交换树脂吸附，树脂粒度0.315～1.25mm；吸附结束后用去离子水和0.04～0.06%氯化钠溶液洗涤，去除AR、AMP、ADP等原料物和合成副产物，再用4.0～6.0%的氯化钠溶液洗脱，得到三磷酸腺苷洗脱液；h）三磷酸腺苷洗脱液经过截留分子量为3000～10000的超滤膜处理去除蛋白质和热源，通过活性炭吸附去除色度物质；i）上述经过超滤膜处理和活性炭吸附的三磷酸腺苷洗脱液经过无水乙醇沉淀、离心分离、淋洗和浸泡提纯，得到三磷酸腺苷固体，无水乙醇的用量为三磷酸腺苷超滤膜透过液的2.5～3.5倍，再经过38～42℃的真空干燥，得到三磷酸腺苷成品。