一种用生物技术生产中药材原料喜树碱的方法

摘要

本发明是一种生物技术领域的提高喜树毛状根中喜树碱含量的方法。从长春花中克隆出异胡豆苷合成酶基因CrSTR和香叶醇-10-脱氢酶CrGlOH的编码框序列，构建含上述双关键酶基因的植物双价高效表达载体，以发根农杆菌介导转化喜树获得转基因的喜树毛状根。本发明获得的转基因喜树毛状根中喜树碱含量显著提高，喜树碱含量达到对照的6.1倍，羟基喜树碱含量达到对照的2.8倍。本发明提供了一种提高喜树毛状根中喜树碱含量的方法，为生产具重要临床需求的抗癌药物喜树碱和羟基喜树碱提供了一种新途径。

主权项

一种利用基因工程技术提高喜树碱产量的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将异胡豆苷合成酶基因CrSTR和香叶醇‑10‑脱氢酶基因CrGlOH插入植物表达载体，构建重组载体后，转入发根农杆菌，构建含有重组载体的发根农杆菌；(2)利用发根农杆菌菌株转化喜树，获得毛状根，并进行培养；(3)检测毛状根中的异胡豆苷合成酶基因CrSTR和香叶醇‑10‑脱氢酶基因CrGlOH，取筛选结果为阳性的转基因毛状根克隆。