一种高效发酵生产L-山梨糖的方法

摘要

本发明公开了一种高效发酵生产L-山梨糖的方法，以固定化基因工程菌为生产种子，接种到种子培养基中，500mL摇瓶装液50mL，于30℃、200rpm条件下增殖培养20-24h；按15%的接种量将培养好的固定化种子接入发酵培养基，30℃，500rpm，2.5vvm，1-L发酵罐条件下半连续补料发酵21天。应用上述方法以山梨醇为唯一碳源，发酵16h后，D-山梨醇转化率达到90%以上，与对照菌株相比提高了37%；以山梨醇为唯一碳源，可完成21天的固定化细胞的半连续补料发酵，与游离菌发酵相比节约20批次的种子制备成本。

主权项

一种高效发酵生产L‑山梨糖的方法，其特征在于以固定化基因工程菌为生产种子，接种到种子培养基中，500mL摇瓶装液50mL，于30℃、200rpm条件下增殖培养20‑24h；按15％的接种量将培养好的固定化种子接入发酵培养基，30℃，500rpm，2.5vvm，1‑L发酵罐条件下半连续补料发酵21天；所述基因工程菌为产山梨醇脱氢酶基因的氧化葡萄糖酸杆菌工程菌，其构建方法为将携带poly A/T尾巴的山梨醇脱氢酶基因与强启动子连接，克隆到表达载体后转化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)WSH‑003得到基因工程菌；所述山梨醇脱氢酶基因根据Genbank:NC_006677.1通过化学全合成方法获得，并在其基因终止密码子后添加polyA/T尾巴；所述固定化基因工程菌采用的固定化方法为：采用海藻酸钠和硅藻土共固定化制备得到直径为2‑mm的固定化细胞；所述强启动子是来源于G.oxydans WSH‑003的tufB启动子。