快速鉴定与黄曲霉毒素B1互作的宿主蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种通过固相层析寻找出黄曲霉毒素B₁的结合蛋白的方法，利用该方法可以快速有效地找出该毒素的结合蛋白，进而促进对该毒素的致毒机理的研究。更加具体地，该方法包含，将黄曲霉毒素B₁与载体蛋白进行偶联，将偶联复合物固定在PVDF膜上，让偶联复合物与总蛋白孵育，进行非特异性洗涤和特异性洗脱并进行质谱鉴定。通过体外结合验证发现该方法得到的真菌毒素的互作蛋白准确度较高。

主权项

一种快速鉴定与黄曲霉毒素B₁互作的宿主蛋白的方法，其特征在于：先将黄曲霉毒素B₁与牛血清白蛋白进行偶联，再通过固相层析的方法，筛选与黄曲霉毒素B₁结合的蛋白，经质谱分析鉴定后，再通过体外结合实验验证蛋白与黄曲霉毒素B₁的结合性；所述的通过固相层析的方法来筛选与黄曲霉毒素B₁结合的蛋白，是将牛血清蛋白‑黄曲霉毒素B₁偶联复合物展示在甲醇活化后的PVDF膜上，3‑5℃过夜孵育；将孵育了牛血清蛋白‑黄曲霉毒素B₁的PVDF膜用质量分数为2% 牛血清蛋白溶液进行封闭后，将膜置于小鼠肝脏总蛋白溶液中3‑5℃过夜孵育以充分结合，同时用只展示牛血清蛋白分子的PVDF膜置于小鼠肝脏总蛋白溶液中作为阴性对照；再用3‑5℃预冷的磷酸盐缓冲液或磷酸盐吐温缓冲液进行非特异性洗脱，3‑5℃振摇10‑15min，洗涤三‑四次，用2M的NaCl进行特异性洗脱，3‑5℃振摇25‑30min，洗脱液中的互作蛋白浓缩后进行SDS‑PAGE分析，银染后取差异条带进行质谱分析鉴定。