一种测定次黄苷与次黄苷-5^′-单磷酸钠相对含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定次黄苷与次黄苷-5'-单磷酸钠相对含量的方法，利用由嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶组成的酶偶联体系将次黄苷-5'-单磷酸钠样品中的次黄苷转化为紫红色醌衍生物并测定特定波长下溶液吸光度值A₁、加入含5'-核苷酸酶的缓冲液后继续反应一段时间后测定吸光度值A₂、利用A₁值和A₂值计算出黄苷-5'-单磷酸钠底物中次黄苷与黄苷-5'-单磷酸钠相对含量，绿色、环保，无需校准品对照即可计算出次黄苷与黄苷-5'-单磷酸钠的相对含量，并且用普通的可见分光光度计就可以实现检测，灵敏度高，线性、精密度好，结果准确，且操作简便快速，并可用于各种类型的分析仪，达到大规模测定样本的要求。

主权项

一种测定次黄苷与次黄苷‑5'‑单磷酸钠相对含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、配制含有MgCl₂、PNP、XTO、POD、4‑AAP、TOOS、乙二醇、、蔗糖的pH 7.4‑7.8磷酸氢二钾‑磷酸二氢钾(K₂HPO₄‑KH₂PO₄)缓冲液，得试剂A；步骤2、往步骤1所得的试剂A中加入含次黄苷和次黄苷‑5'‑单磷酸钠的待测样品，在37℃环境中，反应3.5‑5min，直至样品中的次黄苷被转化为紫红色醌衍生物后，测定540‑560nm波长下的吸光度A₁；步骤3、配制含5'‑NT、乙二醇、蔗糖的pH 7.4‑7.8K₂HPO₄‑KH₂PO₄缓冲液，得试剂B；步骤4、将步骤3所得的试剂B加入到步骤2所得溶液中，在37℃环境中，继续反应5‑10min，直至样品中的次黄苷‑5'‑单磷酸钠被转化为紫红色醌衍生物后，测定540‑560nm波长下的吸光度A₂；步骤5、通过以下公式计算出次黄苷与次黄苷‑5’‑单磷酸钠的相对含量：样品液中次黄苷/次黄苷‑5'‑单磷酸钠(％)＝(A₁‑A₀)×100％/(A₂‑A₁×V₁/V₂)，式中，A₀为同体积的去离子水代替样品与试剂A反应所测得的吸光度值，A₁为样品与试剂A反应所测得的吸光度值，A₂为样品与试剂A反应后继续与试剂B反应所测得的吸光度值，V₁为样品液和试剂A混合后的反应体积，V₂为样品液与试剂A、试剂B混合后的总反应体积 。