诺西肽生物合成控蛋白NosP的特异性结合序列及相关应用

摘要

本发明公开了诺西肽生物合成调控蛋白NosP的特异性结合序列及其对诺西肽生物合成效价的影响。具体包括以下内容：构建含有特异性亲和纯化标签和截短nosP基因的重组表达质粒，并在大肠杆菌异源表达和亲和层析法制备NosP蛋白纯品。利用EMSA和DNase Ⅰ footprinting assay技术寻找活跃链霉菌诺西肽生物合成基因簇中的NosP特异性结合序列并验证。在此基础之上，通过诺西肽生物合成途径改造，使诺西肽生物合成效价提高150％，应用前景广阔。

主权项

诺西肽生物合成调控蛋白NosP的特异性结合序列，其特征在于采用如下方法制备得到，方法包括以下步骤：(1)构建含有nosP基因及相关纯化标签的重组表达质粒并导入大肠杆菌内，异源表达NosP蛋白，并采用亲和层析的方法纯化制备可用于EMSA和DNase Ⅰ footprinting assay的高纯度NosP蛋白；(2)通过EMSA和DNase Ⅰfootprinting assay技术寻找活跃链霉菌诺西肽生物合成基因簇中的NosP特异性结合序列并实验验证。