一种体外扩增胰岛β细胞的方法

摘要

本发明公开了一种体外扩增胰岛β细胞的方法，包括：（1）制备Reg Ⅰα蛋白的表达上清；（2）分离纯化胰腺导管上皮细胞，诱导分化获得胰岛β细胞；（3）将步骤（1）制备的Reg Ⅰα蛋白的表达上清加入到细胞培养基中，接种所述的胰岛β细胞进行培养。本发明体外扩增胰岛β细胞的方法可用于建立体外扩增胰岛β细胞的增殖模型，有助于大批量筛选促胰岛β细胞增殖药物，获得有效体内外扩增胰岛β细胞药物，尤其是中成药物，从而可通过体外扩增富集胰岛β细胞提供糖尿病治疗供体细胞，或是中成药通过调理改善胰岛β细胞增殖条件。

主权项

一种体外扩增胰岛β细胞的方法，其特征在于，包括：(1)制备Reg Ⅰ α蛋白的表达上清；(2)分离纯化胰腺导管上皮细胞，诱导分化获得胰岛β细胞；(3)将步骤(1)制备的Reg Ⅰ α蛋白的表达上清加入到细胞培养基中，接种所述的胰岛β细胞进行培养；步骤(1)中，Reg Ⅰ α蛋白的表达上清的制备方法为：克隆Reg Ⅰ α基因，所述Reg Ⅰ α基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，将Reg Ⅰ α基因连入真核表达载体，并转染HEK‑293细胞；转染细胞经RPMI‑1640培养基培养后离心，上清液即为所述的Reg Ⅰ α蛋白的表达上清；宿主细胞的接种密度为每孔1×10⁵个细胞，培养温度37℃，培养时间为24‑48h；所述真核表达载体为pC‑DNA3.1(‑)；步骤(3)中，在细胞培养基中，培养温度为37℃，培养时间为48‑102h，胰岛β细胞的接种密度为每孔1×10⁴个细胞；所述胰腺导管上皮细胞为大鼠胰腺导管上皮细胞。