异种角膜材料的制备方法

摘要

本发明公开了一种异种角膜材料的制备方法，该方法能够制备出透明性极高、低免疫原性、生物活性和生物相容性好的异种角膜材料，且保持胶原三维结构与新鲜角膜相近，并通过胶原交联进一步降低胶原的抗降解性和免疫原性。在制备全过程在保存、辐照和交联中使用不同浓度甘油，合理利用不同浓度甘油的特点及作用效果，达到使其异种角膜植片透明、无病毒及细胞的特性，并在全眼球保存下使用交联剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)交联，使其形态更接近新鲜角膜，并增加其生物力学性能。本发明制备的角膜材料在角膜胶原纤维结构的保存和移植后透明性能均有改善，能广泛应用于医疗领。

主权项

一种异种角膜材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）细胞失活：在已死亡动物体上获取可作为异种角膜材料的眼球，整个眼球转入溶液中密封保存，保存过程中逐渐降温，每分钟降温2‑3℃，最终在‑78℃的温度下进行长期保存，所述保存期限至少为4周，所述溶液包括甘油和缓冲溶液，其中甘油浓度为85～95%，缓冲溶液浓度为5～15%；（2）灭病毒：将上述步骤（1）中已经经过密封保存的整个眼球转至‑20℃的保温容器中，用γ射线进行辐照，辐照剂量为25kGy；    （3）交联：将上述步骤（2）中的整个眼球转至含有20～80%甘油的交联剂中，在4℃的温度下保存1～72小时；所述交联剂为 1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺，其中1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺之间的质量比为1:1～3:1； 1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺在溶液中最终浓度为1.0～10.0%；（4）植片制作：将上述步骤（3）中的整个眼球沿眼球角膜缘后2毫米剪开，植片于角膜板层切削器中，切削器对角膜的切削厚度为200～550μm。