一种基于绿光辐射量子点的单色ECL免疫检测方法

摘要

本发明公开了一种基于绿光辐射量子点的单色ECL免疫检测方法，主要包括(1)CdSe量子点标记二抗(CdSe QDs-Ab₂)的制备，(2)以CdSe量子点为标记物的单色ECL免疫传感器的制备和(3)绘制工作曲线，进行单色ECL免疫检测三个步骤。本发明方法检测的灵敏度高，检测限达到0.1fg/mL，可以实现对抗原的单分子检测；选择性高。本发明构建的电化学发光免疫传感器是基于抗原和抗体之间的特异性识别和结合构建的，因此待测液中的干扰蛋白并不能与抗原第一抗体和第二抗体结合，对本发明检测体系无干扰。

主权项

一种基于绿光辐射量子点的单色ECL免疫检测方法，包括步骤如下：(1)CdSe量子点标记二抗(CdSe QDs‑Ab₂)的制备向巯基丙酸和六偏磷酸钠包被的CdSe量子点的水溶液中加入含有1‑乙基‑3,3‑二甲基氨丙基碳化二亚胺(EDC)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)的缓冲溶液进行活化，离心纯化并分散在磷酸盐缓冲溶液中；然后加入二抗和小牛血清白蛋白，室温孵育1‑2h后离心纯化，所得沉淀物分散在磷酸盐(PBS)缓冲溶液中，得CdSe量子点标记的二抗(CdSe QDs‑Ab₂)；(2)以CdSe量子点为标记物的单色ECL免疫传感器的制备a、将玻碳电极抛光处理后，置于含对氨基苯甲酸(ABA)的磷酸盐缓冲溶液中，在0.4～1.2V的电位范围内进行循环伏安扫描，制得对氨基苯甲酸(ABA)修饰的玻碳电极，再用含有1‑乙基‑3,3‑二甲基氨丙基碳化二亚胺(EDC)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)的缓冲溶液进行活化，得修饰并活化后的玻碳电极；b、向修饰并活化后的玻碳电极表面滴加含一抗(Ab₁)的缓冲溶液，室温下孵育1‑4h后用pH 7.4的磷酸盐(PBS)缓冲溶液清洗，再用小牛血清蛋白(BSA)封闭未反应的活性位点并用磷酸盐(PBS)缓冲溶液清洗；c、将抗原(Ag)滴加到步骤b处理后的电极表面，室温下孵育1‑4h，清洗电极；再将CdSe量子点标记的二抗(CdSe QDs‑Ab₂)滴加到步骤b处理后的电极表面，室温下孵育1‑4h，清洗电极；制得以CdSe量子点为标记物的单色ECL免疫传感器；(3)绘制工作曲线，进行单色ECL免疫检测i、以步骤(2)制得的CdSe量子点为标记物的单色ECL免疫传感器为工作电极，铂电极为对电极、Ag/AgCl电极为参比电极，在含0.01‑0.1mol/L过硫酸铵的磷酸盐(PBS)缓冲溶液中，采用循环伏安法对一系列标准浓度的抗原溶液进行ECL测试，绘制工作曲线；ii、将待测样品溶液按照步骤i中的方法进行ECL测试，根据所得电化学发光的光信号强度对应工作曲线，得到待测样品溶液中抗原的浓度。