一种蒙花苷单体的分离纯化方法

摘要

本发明提供了一种蒙花苷单体的分离纯化方法，该方法包括如下工艺步骤：（1）提取：将野菊花药材以乙醇溶液回流提取，收集滤液；（2）浓缩：将滤液浓缩后静置析晶并烘干沉淀；（3）溶剂洗涤：将沉淀以甲醇进行超声波洗涤，过滤，收集过滤固体，烘干；（4）溶解、过滤：经烘干后的固体中，加入有机溶剂溶解，过滤，收集滤液；（5）高效制备液相色谱分离：针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液；（6）产品回收：回收乙腈，蒙花苷单体析出后经干燥得到蒙花苷单体产品。本发明操作简便，生产周期短，分离效率高，工艺稳定，成本易控制，可实现大量蒙花苷单体的高纯度分离制备，蒙花苷单体纯度高，可作为含量测定的对照品使用。

主权项

一种蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤：（1）提取将野菊花药材粉碎成直径3mm的粗粉，按照药材重量:乙醇溶液体积=1Kg:10L计算，加入体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取3～4次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；（2）浓缩将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至原滤液体积的10%，常温下静置析晶10～12小时，过滤收集沉淀，除去滤液，将沉淀60℃烘干后进行下一步洗涤处理；（3）溶剂洗涤向步骤（2）经烘干后的沉淀中加入10倍量体积的甲醇进行超声波洗涤，待产品与甲醇成混悬液后用中速滤纸过滤，收集过滤固体，60℃烘干后待下一步处理；（4）溶解、过滤将步骤（3）经烘干后的固体中，按照固体物质量：溶剂体积=1g:10mL，加入有机溶剂溶解，溶解后的溶液用有机膜过滤，滤除颗粒杂质，收集滤液；（5）高效制备液相色谱分离取步骤（4）所得的滤液进样，用反相高效液相色谱法制备分离蒙花苷单体，紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液；所述反相高效液相色谱法的色谱条件如下：采用填料为C₁₈的色谱柱；以乙腈‑0.3wt%醋酸水溶液V/V=30:70为流动相；检测波长为334 nm；（6）产品回收将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，蒙花苷单体在剩余醋酸水溶液中析出，放置室温后用漏斗过滤析出固体，固体65℃干燥至干，即得到蒙花苷单体产品；步骤（4）所述有机溶剂为吡啶、四氢呋喃或二甲基甲酰胺；所述蒙花苷单体进行高效制备液相色谱分离前，采用液‑质联用方法或气‑质联用、核磁共振碳谱、氢谱确定高效液相色谱中蒙花苷单体的峰形；所述液‑质联用方法采用填料为C₁₈的色谱柱，流动相组成及流速与步骤（4）所述反相高效制备液相色谱法相同，柱温为室温，检测波长为334nm，紫外检测器在线监测，根据色谱峰峰形和质谱检测结果，确定蒙花苷单体在液相色谱中所对应的峰形与位置。