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一种水稻种胚POD测定方法，其特征在于：包括以下步骤；(1)胚POD提取液的配制：先配制0.1M pH 8.5Tris‑HCl缓冲液：A液，取3.0285g Tris，溶解，定容至250ml；B液，取1ml浓盐酸，稀释120倍；取250mlA液和73.5mlB液，混匀，定容至500ml。用pH试纸校准。再在每100毫升0.1M pH 8.5Tris‑HCl缓冲液中加入10％甘油，2.5％Tween20。(2)种子胚POD检测液的配制：先配制0.2M pH 6.0磷酸缓冲液：A液，取15.605g磷酸二氢钠(含2水)，溶解，定容至500ml；B液，取7.164g磷酸氢二钠(含12水)，溶解，定容至100ml。取438mlA液和62mlB液，混合，定容至500ml。再取配好0.2M pH 6.0磷酸缓冲液50ml，过氧化氢0.028ml，愈创木酚0.019ml混合。(3)取样水稻每个材料种子100粒左右，去壳，用刀片切或镊子挖取水稻胚，约70mg左右胚，置于‑80℃冰箱，待用。(4)胚POD酶液的提取定量称取20mg胚，置于于研钵中，加上述2ml胚POD提取液，研磨成匀浆，再加2ml分两次洗涤，至研磨总体系4ml，4000rpm离心10min。取上清液1.5ml即为粗酶提取液。(5)胚POD酶活性的测定向比色皿加入1.5ml粗酶提取液，再加入反应液2.5ml，每隔1min读数一次，以0.2M pH 6.0磷酸缓冲液为对照调零。470nm处测定5min的OD变化值。做3个重复，计算平均值。(6)结果计算后，即可。 |
