负载新城疫病毒F基因质粒DNA的LDH@SiO₂纳米粒的制备方法

摘要

负载新城疫病毒F基因质粒DNA的LDH@SiO₂纳米粒的制备方法，涉及一种负载新城疫DNA疫苗纳米粒的制备方法。是要解决现有DNA疫苗抗原肌注给药易被胃肠道内的代谢酶和酸性环境降解，需多次免疫，不能够实现缓释和黏膜免疫，质粒DNA免疫原性较弱，需用较强的免疫佐剂或合适的基因递送系统才能有效诱导免疫应答的问题。方法：一、采用溶胶凝胶法合成SiO₂纳米粒；二、pVAX1-optiF/SiO₂纳米粒的合成；三、载新城疫F基因质粒DNALDH@SiO₂纳米粒的合成。本发明克服了抗原质粒DNA易被降解、免疫持续时间短、次数多等缺点，方法简单，条件温和，生产成本低、易于规模化生产。用于DNA疫苗领域。

主权项

负载新城疫病毒F基因质粒DNA的LDH@SiO₂纳米粒的制备方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、采用溶胶凝胶法合成SiO₂纳米粒；二、pVAX1‑optiF/SiO₂纳米粒的合成：A、SiO₂氨基化：配制体积百分浓度为1％～1.5％的3‑氨基丙基三乙氧基硅烷的乙醇溶液，称取1～1.5mg SiO₂纳米粒置于上述溶液中，室温下磁力搅拌10～12h，离心收集沉淀，用无水乙醇洗涤沉淀三次，将沉淀室温下干燥，即得氨基化的SiO₂纳米粒；B、称取氨基化的SiO₂纳米粒分散于PBS缓冲溶液中，配制成1mg/mL的纳米粒悬液，向纳米粒悬液加入质粒DNA pVAX1‑optiF，用移液枪缓慢吸打混匀，室温下孵育15min，4℃、10000～11000r/min离心10min收集沉淀，用PBS洗涤三次，沉淀用PBS缓冲液重悬，即得pFDNA‑SiO₂‑NPs；三、载新城疫F基因质粒DNA LDH@SiO₂纳米粒的合成：a、称取6.3g NaOH和9.1g NaNO₃溶解于72mL煮沸后的去离子水中，得溶液A，将16g Mg(NO₃)₂·6H₂O和11.7g Al(NO₃)₃·9H₂O溶解于63mL煮沸后的去离子水中，得溶液B；b、向溶液A中加入0.8g pFDNA‑SiO₂‑NPs，在N₂保护及搅拌条件下，将溶液B以3mL/min的速度缓慢滴加到上述混合液中，滴加完毕后继续在室温下搅拌1～1.5h；离心收集沉淀，用煮沸后的去离子水洗涤沉淀至上清液为中性，室温真空干燥即得pFDNA‑LDH@SiO₂‑NPs。