一种基于γ-Fe₂O₃纳米粒子间接富集免疫磁分离的食源性致病菌快速检测方法

摘要

一种基于γ-Fe₂O₃纳米粒子间接富集免疫磁分离的食源性致病菌快速检测方法，属于食品安全致病菌快速检测技术领域。本发明依赖于建立的可以用于食品液体样本中致病菌的检测方法，利用1抗特异性结合目标菌，利用γ-Fe₂O₃纳米粒子材料制备2抗免疫磁珠针对性地富集1抗标记的目标菌株，通过分离捕获了目标菌的纳米磁珠，再硝化反应使之转化为铁离子，检验铁离子从而间接检测出样本中是否含有目标致病菌。在一定条件下铁离子的量与目标菌显示出线性关系，在一定范围能够定量检测目标菌。该方法可以用于食品样本中有害致病菌的快速检测，从而可以作为大批待检样品的快速筛选。

主权项

一种基于γ‑Fe₂O₃纳米粒子间接富集免疫磁分离的食源性致病菌快速检测方法，其特征步骤如下：1）将目标菌与检测目标菌的1抗结合形成1抗复合物；2）2抗特异性免疫磁珠的制备，所述2抗为检测目标菌1抗的抗体；3）将检测目标菌的特异性单克隆1抗在酶标板上的固定；4）免疫磁珠富集目标菌株，并分离：将第2）步制得的2抗免疫磁珠加入到第1）步结合了1抗的待检样品，充分混合震荡，抓取目标菌后施加外加磁场，磁珠汇集到磁场一边，吸走上清液分离出磁珠；若待检样本中有目标菌，目标菌首先与1抗结合形成1抗复合物，在加入2抗磁珠后，通过2抗与1抗的相互作用，从而捕获1抗复合物，被磁珠所富集，加少量无菌的去离子水，形成目标菌的磁珠悬浊液；5）将富集的磁珠悬浊液加到第3）步固定了检测目标菌的特异性单克隆1抗的酶标板上，若存在目标菌则形成双抗夹心，用无菌的去离子水清洗，则没有抓取到目标菌的磁珠就被洗掉，若不存在目标菌，则所有磁珠都被洗掉；6）之后，用洗脱剂将酶标板上的双抗夹心的磁珠洗下来，用外加磁场分离磁珠的方法用无菌的去离子水清洗掉离子和溶剂，如果还存在磁珠就是抓到目标菌的磁珠；7）这部分磁珠，加入分析纯的王水进行硝化反应，使磁珠γ‑Fe₂O₃转变为三价铁离子和二价铁离子；中和过量酸后采用邻二氮菲吸光光度法或硫氰酸钾比色法检测出铁离子的量，从而算出磁珠的量，通过加标定量磁珠而在一定程度间接定量出目标菌的量。