适用于检测泡型包虫病抗体的囊型包虫病囊液脱酯抗原及其制备方法

摘要

本发明涉及人和动物泡型包虫病抗体检测技术领域，是一种适用于检测泡型包虫病抗体的囊型包虫病囊液脱酯抗原及其制备方法。本发明所得适用于检测泡型包虫病抗体的囊型包虫病囊液脱酯抗原用于酶联免疫吸附试验双抗原夹心法检测泡型包虫病抗体,能有效提高检测试剂的质量，具有特异性强、敏感性高、性能稳定和用途广的特点，可检测人和各种动物的泡型包虫病抗体，便于比较不同种动物抗体含量；根据免疫学反应原理，本发明所得适用于检测泡型包虫病抗体的囊型包虫病囊液脱酯抗原，还可用于制备胶体金免疫层析试剂等多种检测泡型包虫病抗体的快速检验试剂，为包虫病鉴别诊断、流行调查和疫情监测工作创造了有利条件。

主权项

一种适用于检测泡型包虫病抗体的囊型包虫病囊液脱酯抗原，其特征在于按下述步骤得到：第一步，采集绵羊囊型包虫病包囊液，在包囊液中加入固体硫酸铵溶解，使包囊液中硫酸铵的浓度达到饱和浓度的30％，用氢氧化钠或氢氧化铵调节至pH 7.2，然后按调节pH后液体体积的30％至50％的量加入氯仿或石油醚，剧烈振荡成混悬液，混悬液静置至氯仿或石油醚与包囊液分层，再剧烈振荡并静置分层2次，然后4000g离心20min后，弃沉淀和氯仿或石油醚，收集处理后的包囊液；第二步，在第一步处理后的包囊液中加入固体硫酸铵溶解，使处理后的包囊液中硫酸铵浓度达到饱和浓度的50％至70％，用氢氧化钠或氢氧化铵调节至pH 7.2，在温度为4⁰C至10⁰C的冰箱中放置4h，然后4000g离心10min后收集沉淀物，弃上清液；第三步，将第二步收集的沉淀物加入到20倍沉淀物体积量的硫酸铵溶液中，硫酸铵溶液的pH 为7.2，硫酸铵的浓度为饱和浓度的50％至70％，振荡使其成为混悬液，然后4000g离心10min后，收集沉淀物，弃上清液；第四步，将第三步收集到的沉淀物加入到20倍沉淀物体积量的硫酸铵溶液中，硫酸铵溶液的pH 为7.2，硫酸铵的浓度为饱和浓度的50％至70％，振荡使其成为混悬液，然后4000g离心10min后收集沉淀，弃上清液，在收集到的沉淀物中加入10倍沉淀物体积量的蒸馏水，振荡使沉淀物溶解后，加入与沉淀物溶解后溶液等体积量的氯仿或石油醚，剧烈振荡成混悬液，静置至氯仿或石油醚与溶液分层，再剧烈振荡并静置分层2次，收集水溶液；第五步，将第四步收集的水溶液装入透析袋中，将透析袋放入生理盐水中，生理盐水的体积为透析袋中水溶液体积的20倍，在温度为4⁰C至10⁰C的冰箱中进行透析12h至24h，其间换生理盐水3次，每次更换生理盐水体积为透析袋中水溶液体积20倍，透析完成后，透析袋中的溶液4000g离心20min，弃沉淀，收集上清液，上清液即为囊型包虫病囊液脱酯抗原。