一种鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法

摘要

本发明提供了一种鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法，包括(1)种子活化、(2)接种、(3)发酵和(4)诱导四步骤组成；所述鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法，通过有效控制发酵过程中的关键参数实现了重组大肠杆菌高密度生长，尤其在配合使用改良后的发酵培养基与补料培养基的情况下，在充分满足工程菌发酵过程中营养要求的同时，使鸡α干扰素的单位产量提高为改良前的3～4倍，有效降低了生产成本，对大规模工业生产具有非常重要的指导意义。

主权项

一种鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)种子活化：将表达鸡α干扰素的工程菌株大肠杆菌在固体LB培养基上活化，然后挑取一单菌落至50mL LB液体培养基中，在30～37℃，180～220rpm，培养12～24小时；再将得到的种子液按体积比1％～5％的接种量接种至LB培养基中，在30～37℃，180～220rpm，培养6～12小时，得到发酵种子液，其中，所述LB培养基：每升H₂O中蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g；(2)接种：向发酵罐中填充发酵培养基，然后按体积比5％～10％的接种量将上述活化好的种子液接种至液体发酵培养基中，其中，所述发酵培养基：每升H₂O中含有葡萄糖5～10g、蛋白胨5～10g、酵母粉5～10g、KH₂PO₄ 2～4g、K₂HPO₄ 1～4g、Na₂HPO₄·12H₂O 2～7g、(NH₄)₂SO₄ 0.6～1.2g、NH₄Cl 0.1～0.3g、MnSO₄·5H₂O 0.001～0.01g、CoCl₂·6H₂O 0.004～0.01g、Na₂MoO₄·2H₂O 0.001～0.005g、ZnCl₂0.001～0.01g、CuSO₄·5H₂O 0.001～0.01g、H₃BO₄0.002～0.012g、FeSO₄·7H₂O 0.01～0.02g、CaCl₂·2H₂O 0.01～0.04g、MgSO₄·7H₂O 0.1～0.6g、消泡剂0.1～0.3g；(3)发酵：向发酵罐中通入空气或者空气/氧气的混合气体，通气量为2～4m³/h，发酵温度30～37℃，搅拌转数300～900rpm，溶氧控制在20％～40％，pH控制在6.8～7.4，发酵时间11～24小时，当OD_600nm＝2～4时开始补料，补料的流加速度是100～1000mL/h，该补料培养基：每升H₂O中葡萄糖120～260g、蛋白胨30～60g、酵母粉15～35g、MgSO₄·7H₂O 2～6g、NaCl 3～7g；(4)诱导：当OD_600nm＝4～6时开始添加IPTG诱导鸡α干扰素的表达，最后进行蛋白纯化，得到目的蛋白。