一种快速准确鉴定乌鳢、斑鳢及杂交鳢的方法

摘要

本发明涉及一种快速准确鉴定乌鳢、斑鳢及杂交鳢的方法，该方法包括步骤：1）引物合成；2）乌鳢、斑鳢及杂交鳢[斑鳢（♀）╳乌鳢（♂）]DNA的提取；3）SRAP-PCR反应采用复性变温法；4）电泳检测；5）对能用于鉴定乌鳢、斑鳢及杂交鳢[斑鳢（♀）╳乌鳢（♂）]的引物组合，用Gelpro32软件处理条带，标出条带的大小，并在其它采样的群体中验证。本发明在不处死鱼种的基础上，只需剪去少量鳍条或其它鱼体组织部分，利用SRAP技术便很容易区别乌鳢、斑鳢及杂交鳢[斑鳢（♀）╳乌鳢（♂）]的方法。

主权项

一种快速准确鉴定乌鳢、斑鳢及杂交鳢的方法，其特征在于，包括步骤：1)引物合成步骤：根据2001年由美国加州大学蔬菜作物系Li和Quiros博士提出的一种基于PCR的新型分子标记技术‑相关序列扩增多态性，合成引物；所述合成引物为Me3‑Em5或Me4‑Em5；所述Me3的序列为：5＇‑TGAGTCCAAACCGGAAT‑3＇；所述Me4的序列为：5＇‑TGAGTCCAAACCGGACC‑3＇；所述Em5的序列为：5＇‑GACTGCGTACGAATTAAC‑3＇。2)乌鳢、斑鳢及杂交鳢[斑鳢(♀)╳乌鳢(♂)]DNA的提取步骤：剪取三种鱼的胸鳍，用苯酚法提取组织的DNA，把DNA浓度稀释到20ng/μl，放入–20℃以下保存；3)SRAP‑PCR反应步骤，其中SRAP‑PCR反应采用复性变温法；具体是指：扩增程序:94℃预变性3min；94℃预变性45s，35℃退火45s，72℃延伸1min，共5个循环；94℃预变性45s，50℃退火45s，72℃延伸1min，共35个循环；72℃延伸10min；4℃保存；4)电泳检测步骤：用1.5％琼脂糖检测扩增产物，筛选能用于鉴定乌鳢、斑鳢及杂交鳢[斑鳢(♀)╳乌鳢(♂)]的引物组合，并在其它采样的群体中验证；5)用Gelpro32软件处理条带，并根据扩增出的特异性条带来鉴定乌鳢、斑鳢及杂交鳢。能够扩增出694，268两条带的样本为乌鳢，只扩增出500一条带的样本为斑鳢，而同时能够扩增出以上三条带的为杂交鳢[斑鳢(♀)╳乌鳢(♂)]。