发明名称 |
TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法 |
摘要 |
本发明涉及一种TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法,属于生物技术领域。内容包括:1)HUVEC细胞培养:HUVEC细胞用M199完全培养基置于37℃,5%CO<sub>2</sub>的温箱中培养。2)HUVEC样品制备:待细胞长满至80%-90%单层,用15ml的1mg/ml的I型胶原酶消化15-20min制备成细胞悬液,调整细胞浓度为1*10<sup>6</sup>/ml。3)HUVEC细胞同步化:取2ml细胞悬液至6孔板进行培养,当细胞长满至90%时,换无血清的培养基进行饥饿培养24h,使所有细胞同步化。4)TNF-α诱导HUVEC细胞炎症反应:加入终浓度为10ng/ml的TNF-α,刺激HUVEC细胞6h,取细胞上清液ELISA法测定细胞炎症因子MCP-1、ICAM-1、VCAM-1,蛋白含量均升高。本发明建立起的HUVEC炎症反应细胞模型,简便易行,可用于炎症反应机理研究和抗炎药物的体外细胞实验。 |
申请公布号 |
CN104726393A |
申请公布日期 |
2015.06.24 |
申请号 |
CN201310718727.9 |
申请日期 |
2013.12.24 |
申请人 |
江苏省农业科学院 |
发明人 |
黄午阳;王兴娜;李春阳;闫征;王帆;王健 |
分类号 |
C12N5/071(2010.01)I |
主分类号 |
C12N5/071(2010.01)I |
代理机构 |
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代理人 |
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主权项 |
TNF‑α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法,包括了以下步骤:1)用M199完全培养基(1含酚红、20%新生小牛血清、2mmol/L L‑谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素、100μg/ml血管内皮细胞生长因子‑肝素)置于37℃,5%CO<sub>2</sub>的温箱中培养HUVEC细胞2)HUVEC细胞长满至80%‑90%单层,用15ml的1mg/ml的I型胶原酶消化15‑20min制备成细胞悬液,取10ul于血球计数板上计数,调整细胞浓度为1*10<sup>6</sup>/ml。3)取2ml细胞悬液至6孔板进行培养,当细胞长满至90%时,换无血清的培养基进行饥饿培养24h,使所有HUVEC细胞同步化。4)加入终浓度为10ng/ml的TNF‑α,刺激6h,取细胞上清,根据ELISA法,取细胞上清液在酶标仪450nm下测定OD值看细胞炎症因子MCP‑1、ICAM‑1、VCAM‑1,发现蛋白含量均升高。 |
地址 |
210014 江苏省南京市钟灵街50号 |