发明名称 |
一种鸡胚分离培养血清3型鸭甲型肝炎病毒的方法 |
摘要 |
本发明涉及一种鸡胚分离培养血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)的方法。DHAV-3可致雏鸭发生肝炎,虽然可以通过鸭胚分离和培养病毒,但是通过常规的鸡胚尿囊腔接种的方法很难培养和分离该病毒,本发明采用接种无特定病原(SPF)鸡胚卵黄囊的方法由患病鸭病料中分离出DHAV-3,并能通过SPF鸡胚卵黄囊进行培养和传代,为DHAV-3分离培养、弱毒活疫苗的研制奠定基础。 |
申请公布号 |
CN104726415A |
申请公布日期 |
2015.06.24 |
申请号 |
CN201510007213.1 |
申请日期 |
2015.01.07 |
申请人 |
南京天邦生物科技有限公司 |
发明人 |
张小飞;卢凤英;黄显明 |
分类号 |
C12N7/00(2006.01)I;C12R1/93(2006.01)N |
主分类号 |
C12N7/00(2006.01)I |
代理机构 |
北京君智知识产权代理事务所 11305 |
代理人 |
郑明 |
主权项 |
一种鸡胚分离培养血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV‑3)的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:(1)选取经抗血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV‑1)阳性血清和抗DHAV‑3阳性血清在鸭胚上进行中和试验和交叉中和试验确诊为DHAV‑3的肝脏组织病料用于鸡胚培养分离病毒;(2)DHAV‑3的组织病料的处理:取少许DHAV‑3的肝脏组织,用灭菌生理盐水做1:5(W/V)左右稀释、研磨、冻融2~3次、离心,取离心上清液经0.22μm滤器除菌过滤;(3)鸡胚接种分离病毒:取上述无菌滤液通过卵黄囊接种途径接种6~8日龄SPF鸡胚,每只胚接种0.2~0.5ml,37℃培养,24h内死胚弃之,连续观察至120h,其间若有鸡胚死亡,随时取出置2~8℃冰箱冷藏数小时或过夜;若无死亡,则于72~96h随机取3枚胚置2~8℃冷藏过夜;(4)鸡胚传代接种:及时取出胚体,研磨成匀浆、离心取上清液经0.22μm除菌过滤,取滤液经卵黄囊接种6~8日龄SPF鸡胚5~10枚,每只胚0.2~0.5ml;盲传5~10代,随着传代次数的增加,鸡胚死亡时间前移,鸡胚死亡率也逐渐达到100%,表明通过鸡胚分离病毒成功,并逐渐适应鸡胚培养。 |
地址 |
211102 江苏省南京市江宁经济技术开发区清水亭东路999号 |