一种酶法制备莱鲍迪苷M的方法

摘要

本发明公开了一种酶法制备莱鲍迪苷M的方法，该方法利用番茄UDP-糖基转移酶和土豆蔗糖合成酶，以莱鲍迪苷A和蔗糖为原料生产莱鲍迪苷M。本发明的方法首先利用基因工程技术获得UDP-葡萄糖基转移酶和蔗糖合酶的高产重组菌株，然后收集生物酶粗品直接进行催化反应，反应体系中不添加UDP或UDP-葡萄糖，以莱鲍迪苷A和蔗糖为原料，通过蔗糖合酶催化UDP-葡萄糖高效循环，通过番茄UDP-葡萄糖基转移酶的作用，催化莱鲍迪苷A生成莱鲍迪苷M。与已有的莱鲍迪苷M制备方法相比，工艺步骤短，成本低，具有重要的应用价值和良好的经济性。

主权项

一种酶法制备莱鲍迪苷M的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）构建工程菌：克隆UDP‑糖基转移酶基因与蔗糖合成酶基因，构建双酶共表达或分别表达的载体，并转移到大肠杆菌、酿酒酵母、毕赤酵母或谷氨酸棒杆菌等宿主菌中，获得过表达UDP‑糖基转移酶和/或蔗糖合酶的工程菌；2）制备莱鲍迪苷M：将构建好的工程菌发酵产酶，发酵得到的菌体超声或高压破碎，获得UDP‑糖基转移酶和蔗糖合成酶的粗酶液；以莱鲍迪苷A和蔗糖为原料，由制得的粗酶液中的UDP‑糖基转移酶催化莱鲍迪苷A进行转化反应制备得到莱鲍迪苷M；该过程生成的UDP再由蔗糖合成酶催化生成UDP‑葡萄糖。