一种快速检测水貂病毒性肠炎病毒的双重PCR方法

摘要

本发明涉及一种快速检测水貂病毒性肠炎病毒的双重PCR方法，包括：分别合成MEV非结构蛋白NS1基因片段的特异性引物SEQ.ID.NO 1和SEQ.ID.NO 2，MEV结构蛋白VP2基因片段的特异性引物SEQ.ID.NO 3和SEQ.ID.NO 4，以上述两对引物为双重引物，以MEV的DNA为模板，在同一反应体系中进行PCR反应，可完成对MEV的快速检测。本发明根据PCR技术原理，根据MEV的特点，建立了检测MEV的双重PCR检测方法，其简单、快速、特异性好、灵敏度高，可以用于MEV的快速检测。

主权项

一组用于快速检测水貂病毒性肠炎病毒的特异性引物，其特征在于选择在MEV的非结构蛋白NS1基因的保守区与结构蛋白VP2基因的保守区，分别设计一对针对NS1基因片段的特异性引物SEQ.ID.NO 1/SEQ.ID.NO 2和一对针对VP2基因片段的特异性引物SEQ.ID.NO 3/SEQ.ID.NO 4；SEQ.ID.NO 1：5’‑GGTTAGCTAAACATGGTTATG‑3’；SEQ.ID.NO 2：5’‑GAGTCAGAGGAGTTAGAACG‑3’；SEQ.ID.NO 3：5’‑CTTTGCCTCAATCTGAAGGAGT‑3’；SEQ.ID.NO 4：5’‑GAATTGGATTCCAAGTATGAGAT‑3’；上述引物的使用方法如下：A、以MEV DNA为模板进行PCR反应；反应体系为：17.3μl ddH₂O(Rnase free)，2.5μl Buffer，2μl dNTPs(10.0mM)，SEQ.ID.NO 1和SEQ.ID.NO 2各1.0μl，SEQ.ID.NO 3和SEQ.ID.NO 4各1.0μl，1μl DNA模板，0.2μl Taq酶；PCR反应条件为：95℃5min；94℃30s，53℃30s，72℃1min，32个循环；72℃10min；B、对步骤A得到的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测：如果同时扩增出了191bp和824bp的产物，则该样品为阳性，样品中含有MEV。