黄曲霉毒素B1免疫反应电极的制备方法

摘要

本发明涉及一种黄曲霉毒素B1免疫反应电极的制备方法，其首先制备聚邻苯二胺修饰金电极，在电聚合聚邻苯二胺修饰金电极基础上固定戊二醛；再将蛋白A有效固定在戊二醛上，蛋白A的氨基与戊二醛的醛基之间发生能生成希夫碱的反应，可以有效提高蛋白A在电极表面的固定量和牢固度。本发明蛋白A/戊二醛/聚邻苯二胺/金电极上固定的AFB1抗体，能够在一定程度上维持其空间构象，使Fab片段都有序地伸向表面外,有效降低抗体与抗原结合的空间阻力，提高抗体的特异性和利用率，提高免疫反应电极的灵敏度。本发明制备方法简单，抗体固定可靠、牢固，抗体的特异性和利用率大大提高，操作简便，灵敏度高，可实现快速测量。

主权项

一种黄曲霉毒素B1免疫反应电极的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：（1）制备聚邻苯二胺修饰金电极：将50 mmol/L的邻苯二胺，溶解于1.0 mol/L H₂SO₄，以金电极为工作电极，铂电极为对电极，硫酸亚汞电极为参比电极，采用循环伏安法制备得到聚邻苯二胺修饰金电极；（2）戊二醛的固定：将上述修饰金电极插入到2.5%戊二醛的磷酸缓冲溶液中，恒温25‑30 ℃，反应时间为40‑60min，将戊二醛固定在该修饰金电极表面；（3）蛋白A的交联固定：将步骤（2）得到的电极放入0.1 g/L的蛋白A溶液中，恒温25‑30 ℃，反应时间为50‑60min，形成蛋白A/戊二醛/聚邻苯二胺/金电极；（4）抗体的固定：将步骤（3）得到的蛋白A/戊二醛/聚邻苯二胺/金电极放入1.2 mg/mL的无标记AFB1抗体溶液中，恒温25‑30 ℃，反应时间为50‑60min，形成AFB1抗体/蛋白A/戊二醛/聚邻苯二胺/金电极；（5）封闭：将步骤（4）得到的电极浸入到3% 小牛血清溶液中，恒温25‑30 ℃，时间为40‑60min，得到AFB1免疫反应电极。