一种通过超高压诱变提高啤酒酵母富锌能力的方法

摘要

本发明公开了一种通过超高压诱变提高啤酒酵母富锌能力的方法，属于微生物育种技术领域。将啤酒酵母出发菌株经活化、菌悬液细胞超高压诱变处理、利用含锌选择性培养基对突变菌株筛选、驯化而提高啤酒酵母对锌的富集能力。采用超高压诱变获得高富锌啤酒酵母突变株，该方法相比较紫外线、化学诱变剂诱变更安全、操作简单、效果更明显。啤酒酵母突变菌株对锌的耐受浓度达到3.2mmol/L，含锌量达到2.75mg/g，比啤酒酵母出发菌含锌量高出6.55倍。

主权项

一种通过超高压诱变提高啤酒酵母富锌能力的方法，其特征在于依次包括以下步骤：⑴ 将斜面保存的啤酒酵母菌进行预培养，接种于YPD液体培养基上，经28℃、150rpm摇瓶培养10h达到对数生长期，取培养菌液于4℃、4000rpm离心10min，以无菌生理盐水制备细胞浓度为10⁶～10⁷个/mL的菌体悬液；⑵ 将所制备的啤酒酵母菌悬液转入灭菌的聚丙烯塑料包装袋内并封口，置于超高压处理机内在250MPa条件下高压处理20min，进行超高压诱变；⑶ 将诱变后的突变菌株涂布在啤酒酵母最大耐受锌浓度（0.8mmol/L）的Zn‑YPD选择性培养基平板上，在28℃恒温箱中倒置培养72h；观察培养皿上长菌情况，挑取生长快、菌落较大的单菌落菌株；⑷ 将初筛出的菌株接种于倍增的最大耐受锌浓度的Zn‑YPD选择性培养基平板上，28℃恒温培养72h，连续驯化传代，得到稳定的抗性突变株，其对锌的耐受浓度达到3.2mmol/L。