一种在模拟环境中测试肽段的离子传输情况的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种在模拟环境中测试肽段的离子传输情况的方法，所述测试方法为荧光光谱法，所述离子为金属离子，该测试方法包括六个步骤：制备缓冲溶液、制备金霉素的标样储备液、制备未添加肽段的磷脂单层囊泡、荧光检测未添加肽段的磷脂单层囊泡、制备添加肽段的磷脂单层囊泡、荧光检测添加肽段的磷脂单层囊泡。本发明针对第四跨膜蛋白区的肽段，进一步改进测试方法及测试条件，本发明的测试方法解决了现有技术中操作复杂、专业性高、成本高、对仪器和操作人员要求均较高的缺点，更便于深入研究第四跨膜蛋白区功能肽段的离子传输情况，并得以揭示整体溶质转运蛋白传输体的传输功能。

主权项

一种在模拟环境中测试肽段的离子传输情况的方法，其特征在于，所述测试方法为荧光光谱法，所述离子为金属离子，所述方法包括以下步骤：步骤一：制备缓冲溶液：用去离子水配制pH值范围在3～7的磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲溶液200～300ml，并加入氯化钠；步骤二：制备金霉素的标样储备液：将金霉素用超纯水稀释，使其浓度为0.05g/L～0.2g/L，用超声溶解，密封备用；步骤三：制备未添加肽段的磷脂单层囊泡：将质量为0.5～2.0mg二肉豆蔻酰磷脂酰甘油放入样品管，加入氯仿和甲醇体积比为2∶1混合溶剂80～150μl，待二肉豆蔻酰磷脂酰甘油完全溶解后吹入氮气直至溶剂挥发完全，脂质体在管的底部形成一层透明的薄膜，真空干燥15～25h后，向样品管中加入金霉素的标样储备液和缓冲溶液，在水浴中超声，得到单层囊泡，使得金霉素分散在单层囊泡的内部和外部；步骤四：荧光检测：选择激发波长为280～380nm，测量步骤三制备的未添加跨膜蛋白的磷脂单层囊泡荧光光谱图，记录其最大发射波长λ_max1；将二价金属离子加入到步骤三的溶液中制备成待测液A，测量待测液A荧光光谱图，记录其最大发射波长λ_max2；放置时间大于24h后，测量待测液A的荧光光谱图，记录其最大发射波长λ_max3；步骤五：制备添加肽段的磷脂单层囊泡：制备肽储备液，将质量为0.5～2.0mg二肉豆蔻酰磷脂酰甘油放入样品管，加入氯仿和甲醇体积比为2∶1混合溶剂80～150μl，加入体积为15～30μl的肽储备液，摇匀待二肉豆蔻酰磷脂酰甘油完全溶解后吹入氮气直至溶剂挥发完全，脂质体在管的底部形成一层透明的薄膜，真空干燥15～25h后，向样品管中加入金霉素的标样储备液和缓冲溶液，在水浴中超声，得到单层囊泡，使得金霉素分散在单层囊泡的内部和外部；步骤六：荧光检测：选择激发波长为280～380nm，测量步骤五制备的添加肽段的磷脂单层囊泡荧光光谱图，记录其最大发射波长λ_max4；将二价金属离子加入到步骤五的溶液中制备成待测液B，测量待测液B荧光光谱图，记录其最大发射波长λ_max5；待其稳定后测量待测液B的荧光光谱图，记录其最大发射波长λ_max6，比较λ_max1～λ_max6的数值结果。