耐RNase的登革病毒核酸检测质控品的制备方法

摘要

本发明公开了一种耐RNase的登革病毒核酸检测质控品的制备方法；利用MS2噬菌体装甲技术和定点突变技术，制备了带有组氨酸标签和登革病毒3’URT基因的装甲RNA质控品，通过镍柱亲和层析纯化得到登革病毒装甲RNA质控品，该质控品具有易于纯化，稳定，高浓度，无生物传染性，耐RNase等特点，可对登革病毒检测中的病毒提取，逆转录，PCR等全过程进行质量控制。

主权项

一种耐RNase的登革病毒核酸检测质控品的制备方法，包括以下步骤：(1)、采用一步法RT‑PCR，以MS2 RNA为模板扩增外壳蛋白基因和成熟酶蛋白基因片段，回收片段和D‑pET32a均用BamH I和Hind III双酶切后连接，转化DH‑5α菌株，获得假病毒表达载体D‑pET32a‑CP；(2)、用Site‑Directed Mutagenesis Kit试剂盒通过PCR扩增的方法在D‑pET32a‑CP载体的衣壳蛋白基因第16个密码子后插入编码6个组氨酸的DNA序列，成功得到带有组氨酸标签的假病毒表达载体D‑pET32a‑CP‑His；(3)、登革病毒3’URT基因克隆于原核表达载体D‑pET32a‑CP‑His中，获得表达载体D‑pET32a‑CP‑His‑DFV；(4)、将表达载体D‑pET32a‑CP‑His‑DFV转入表达菌株中，诱导表达，离心，收集沉淀，镍柱亲和层析纯化获得病毒样颗粒。