野生百合快速繁殖的组织培养方法

摘要

本发明涉及野生百合快速繁殖的组织培养方法，属于花卉培养技术领域。本发明方法采用百合的蕾期花梗作为百合组培的外植体，同时在培养前，对花梗作了彻底的消毒，在培养基中除采用6-BA、NAA、IBA作为生长素或激素外，还添加MES作为缓冲剂，有效地控制了组织培养过程中的酸碱度，使pH值长期维持在百合外植体分化、增殖和生长的最适的范围内，提高了诱导效率和增殖系数，诱导率为98～100%，每个外植体诱导的不定芽数不低于15个，增殖系数为5～7，生根率为100%且根系健壮，适用于杂交后代优良单株的安全繁殖，为百合野生资源的保护提供了有效的手段。

主权项

野生百合快速繁殖的组织培养方法，包括如下步骤：(1)取蕾期幼嫩花梗，消毒除杂菌，(2)将幼嫩花梗纵切成两半，再切成段，将纵切面放置于诱导培养基上进行诱导培养出不定芽，(3)将诱导出的不定芽接到增殖培养基上进行增殖培养，获得丛生芽，(4)将丛生芽接到生根培养基上进行生根培养，获得根系健壮的无菌组培苗；所述诱导培养基为：MS+6‑BA 0.5mg.L^‑1+NAA 1.5mg.L^‑1+蔗糖30.0g.L^‑1+MES 2g.L^‑1+琼脂6.0g.L^‑1，pH＝5.8～6.0；增殖培养基为MS+IBA 0.1mg.L^‑1+蔗糖60.0g.L^‑1+MES 2g.L^‑1+琼脂6.0g.L^‑1，pH＝5.8～6.0；生根培养基为：1/2MS+IBA 0.1mg.L^‑1+NAA 0.1mg.L^‑1+MES 2g.L^‑1+蔗糖60.0g.L^‑1+琼脂6.0g.L^‑1，pH＝5.8～6.0；所述诱导培养条件为培养条件是温度(25±2)℃，遮光，增殖培养条件为培养条件是温度(25±2)℃，遮光，生根培养条件为培养条件是温度(25±2)℃，光照强度2000lx，光/暗周期16h/8h；所述消毒采取如下顺序步骤：先将幼嫩花梗置于含有50％多菌灵500倍液、50mg.L^‑1链霉素和50mg.L^‑1青霉素的水溶液中，150rpm振荡3～5h进行前消毒处理；然后将花梗置于75％酒精中浸泡震荡20～30s，最后放入10％次氯酸钠溶液中浸泡震荡13min，用无菌水冲洗3次，每次冲洗1～2min。