转SSU1基因提升葡萄汁酵母耐硫能力的方法及鉴定方法

摘要

转SSU1基因提升葡萄汁酵母耐硫能力的方法及鉴定方法，属于培育酵母新菌株的方法。本发明包括：提取和纯化葡萄汁酵母DNA：构建SSU1基因表达载体；葡萄汁酵母转基因；葡萄汁酵母菌株耐硫性测定；PCR筛选转化子；PCR产物测序：灭菌后的含硫葡萄汁发酵试验等。测序表明：候选转化子中均含有转基因特征序列。试验表明：转化子ACY330-SSU1和A4-SSU1均能在含15mg/L亚硫酸钠的基质中很好的发酵。本发明获得了葡萄汁酵母耐硫转基因后代菌株，转化子菌株鉴定的准确率极高。

主权项

转SSU1基因提升葡萄汁酵母耐硫能力的方法，包括以下步骤：（1）在YPD培养基中培养葡萄汁酵母以扩增细胞，收集该细胞于离心管后破碎，释放内含物，收集DNA；所述YPD培养基是含10g/L酵母粉、20g/L蛋白胨、 20 g/L琼脂、20g/L葡萄糖的固体培养基；（2）构建葡萄汁酵母SSU1基因表达载体：以耐硫菌株A9的DNA为模板，扩增SSU1基因，引物为L1: GCA GGA TCC GCT TAT TTT GCT CAA TTT TCT T；R1: CAG GTC GAC AAG CCA GTG TTA GCC CAA TC。