一种能降解无定形纤维素的基因重组酿酒酵母

摘要

本发明涉及遗传工程和发酵工程领域，公开了一种能降解无定形纤维素的基因重组酿酒酵母。该基因重组酿酒酵母是将内切β-1,4-葡聚糖酶（EG）基因和β-葡萄糖苷酶（BGL）基因通过酿酒酵母表达载体同时转入酿酒酵母并获得正确的分泌表达而构建成的。该基因重组酿酒酵母可利用无定形纤维素做原料生产乙醇且具有操作简便、节能降耗、绿色环保的特点，在新一代石油替代产品——纤维素燃料乙醇的研制方面具有积极的推动作用。

主权项

一种能降解无定形纤维素的基因重组酿酒酵母，其特征在于，该基因重组酿酒酵母是将内切β‑1,4‑葡聚糖酶基因和β‑葡萄糖苷酶基因通过酿酒酵母表达载体同时转入酿酒酵母AS2.489并获得正确的分泌表达而构建成的；其中，所述的内切β‑1,4‑葡聚糖酶基因为绿色木霉的内切β‑1,4‑葡聚糖酶基因eg3；所述的β‑葡萄糖苷酶基因为绿色木霉的β‑葡萄糖苷酶基因bgl1；所述的酿酒酵母表达载体为酿酒酵母多基因共表达载体pScIKP。2. 一种权利要求1所述的基因重组酿酒酵母的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将内切β‑1,4‑葡聚糖酶基因和β‑葡萄糖苷酶基因接入酿酒酵母表达载体中，构建重组双基因共表达载体；S11.分别将内切β‑1,4‑葡聚糖酶基因和β‑葡萄糖苷酶基因进行PCR扩增；S12.用限制性内切酶BamH I和Spe I切割内切β‑1,4‑葡聚糖酶基因，连接到用同样双酶酶切过的酿酒酵母多基因共表达载体pScIKP上，获得重组质粒pScIKP‑eg3；S13.用限制性内切酶Spe I切割β‑葡萄糖苷酶基因，连接到用同样酶酶切的酿酒酵母多基因共表达载体pScIKP上，获得重组质粒pScIKP‑bgl1；S14.用Nhe I和Xba I双酶切重组质粒载体pScIKP‑eg3，用限制性内切酶Nhe I 单酶切重组质粒载体pScIKP‑ bgl1；用连接酶将酶切后的两个片段连接，获得重组双基因共表达载体；S2.将上述构建得到的重组双基因共表达载体用限制性内切酶Apa I切割，使之线性化后转化到酿酒酵母AS2.489中，构建转基因酿酒酵母。3. 根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，S2中所述的转化是使用电转化法、冷冻法或化学试剂法进行转化。