截短侧耳素菌渣无害化处理的生物菌肥制造方法

摘要

本发明公开了一种截短侧耳素菌渣无害化处理的生物菌肥制造方法，包括截短侧耳素废菌渣无害化处理、细黄链霉菌生物菌肥制备，其中细黄链霉菌生物菌肥制备包括茄子瓶斜面种子培养、摇瓶液体种子培养、1500L种子罐培养、15000L发酵罐培养等步骤。本发明把残留在菌渣中的截短侧耳素去除，利用其基有的有机氮源及生长因子作为细黄链霉菌发酵培养基生产生物菌肥，使截短侧耳素废菌渣循环利用。

主权项

一种截短侧耳素菌渣无害化处理的生物菌肥制造方法，其特征是：包括下列步骤：（一）截短侧耳素废菌渣无害化处理将蛋白质含量为41.62%、截短侧耳素残留量为0.236%的干菌渣100㎏投入1000L搪瓷反应罐中，加入含量1.7%的氨水400L，搅拌均匀，浸泡2h，然后通入蒸汽升温至95℃保温1h，自然冷却后，用HCl调制pH9.0，得到无害化处理后的截短侧耳素菌体溶液，待用；（二）细黄链霉菌生物菌肥制备A）茄子瓶斜面种子培养：（1）取马铃薯200g，切成小块，加水400ml,煮烂后用二层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖20g、琼脂20g，加蒸馏水至1000ml，分别装入250ml茄子瓶中，每瓶装量50ml，121～124℃灭菌30～40分钟；（2）将灭菌后的茄子瓶及细黄链霉菌冷冻管放入无菌净化工作台，按无菌要求将0.1ml冷冻管种子接入茄子瓶中，涂布均匀，塞上棉塞，放入恒温室中，28±1℃ 培养5‑7天；B）摇瓶液体种子培养（1）将玉米淀粉100g、葡萄糖90g、豆粕粉50g、蛋白胨20g、硫酸铵7.5g、硫酸镁2.5g、磷酸氢二钾1.0g投入配料桶中，加入蒸馏水，搅拌，用氢氧化钠溶液调pH7.8，再加入碳酸钙20g，搅拌均匀，定容至5000ml，然后分别装入1000ml三角瓶中，每瓶装量200ml,盖上8层纱布，121～124℃灭菌30～40分钟；（2）将灭菌后的三角瓶及培养好的茄子瓶种子放入无菌净化工作台，按无菌要求将茄子瓶种子接入三角瓶中，每只茄子瓶接5只三角瓶，盖上纱布，放入旋转式摇床进行震荡培养，28±1℃培养32～36h；C）1500L种子罐培养（1）先将玉米淀粉8.4㎏、葡萄糖21.6㎏、豆粕粉16.8㎏、硫酸铵1.8㎏、硫酸镁0.72㎏投入1500L种子罐中，加入自来水，定容至1100L，加温到70℃，控制pH8.0‑8.2，再加入碳酸钙4.8㎏、泡敌0.6㎏，通入蒸汽灭菌，灭菌温度118～122℃，冷却至28‑30℃；（2）接入8瓶摇瓶种子液，罐压0.03～0.05MPa，搅拌转速258rpm，通气量1:0.8～1，28±1℃培养28～32h；D）15000L发酵罐培养 （1）首先将步骤（一）得到的无害化处理后的截短侧耳素菌体溶液泵入15000L发酵罐内，加入自来水，再将玉米淀粉70㎏、葡萄糖180㎏、豆粕粉80㎏、硫酸铵8.2㎏、硫酸镁6㎏投入种子罐中，用自来水定容至10000L，加温到70℃，控制pH8.0‑8.2，再加入碳酸钙40㎏、泡敌6㎏，通入蒸汽灭菌，灭菌温度118～122℃，冷却至28‑30℃；（2）接入种子液，接种量为10%，罐压0.03～0.05MPa，搅拌转速196rpm ，发酵0‑6h阶段的通气量为1:0.8，发酵7h‑放罐阶段的通气量为1:1，培养温度28‑30℃，培养时间40～48h；（3）放罐标准：发酵液稠厚，还原糖0.2%以下，有效活菌数大于0.85亿/ml，即可放罐，装入容器中。