酮还原酶突变体

摘要

本发明公开了可用于柔红霉素(Daunorubicin)衍生物的有效生产的酮还原酶(Ketoreductase)突变体、编码该突变体的DNA、导入了该DNA的生产柔红霉素衍生物的转化体、以及使用该转化体的柔红霉素衍生物制造方法。所述酮还原酶突变体中，氯伊瑞霉素生产菌(Amycolatopsis orientalis)的酮还原酶(EvaE)的氨基酸序列中的选自42、149、153、270和306位的氨基酸相当的位置的氨基酸中的1个或2个以上的氨基酸残基被其他氨基酸残基取代。

主权项

一种提高了柔红霉素衍生物生产性的酮还原酶突变体，其选自下述突变体(1)～(6)中的任意一种：(1)在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中，42位的谷氨酰胺被取代为亮氨酸而成的突变体；(2)在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中，270位的半胱氨酸被取代为精氨酸而成的突变体；(3)在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中，153位的赖氨酸被取代为脯氨酸以外的氨基酸而成的突变体，所述脯氨酸以外的氨基酸选自异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、组氨酸、酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸或色氨酸；(4)在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中，149位的谷氨酰胺被取代为丝氨酸，且153位的赖氨酸被取代为苏氨酸而成的突变体；(5)在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中，153位的赖氨酸被取代为苏氨酸，且306位的谷氨酸被取代为天冬氨酸而成的突变体；(6)在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中，42位的谷氨酰胺被取代为亮氨酸、153位的赖氨酸被取代为苏氨酸、270位的半胱氨酸被取代为精氨酸、且306位的谷氨酸被取代为天冬氨酸而成的突变体。