| 主权项 |
一种食用油中甘油三酯的单柱二维液相色谱‑质谱分析方法，其特征在于：使用的色谱柱为4.6mm×250mm的安捷伦Zorbax Eclipse Plus phenyl‑hexyl；它包括如下步骤：1)食用油中甘油三酯的定性方法(1)在线单柱二维液相色谱‑质谱分离：a、食用油用异丙醇溶解，配成1mg/mL的溶液备用，进样前用相应的流动相稀释成0.01mg/mL，进样体积为10μL；结果发现，流动相为甲醇时，不同双键数甘油三酯得到很好地分离，流动相为乙腈时，不同ECN的甘油三酯得到很好地分离，因此，在甲醇流动相条件下，色谱柱的固定相与甘油三酯之间主要表现为双键与双键之间的络合作用，可以实现不同双键数甘油三酯的分离；在乙腈流动相条件下，固定相与甘油三酯之间主要表现为疏水相互作用，可以实现不同当量碳数甘油三酯的分离；b、根据步骤a优化条件建立在线单柱二维分离的方法，采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈，B：含0.4％(v/v)氨水的甲醇；梯度洗脱:0‑7.5min、50％A(v/v)，50％B(v/v)；7.5‑8.0min,50‑28％A，50‑72％B(v/v)；8.0‑12.9min,28％A(v/v)；12.9‑13.0min,28‑50％A(v/v)；13.0‑26.0min,50％A(v/v)；流速0.8mL/min；在该条件下同时实现12种ECN相同和不同的甘油三酯标准品的分离；(2)离线单柱二维液相色谱‑质谱分离：a、食用油用异丙醇溶解，配成1mg/mL的溶液备用，进样前用相应的流动相稀释成0.01mg/mL，进样体积为10μL；结果发现，流动相为甲醇时，不同双键数甘油三酯得到很好地分离，流动相为乙腈时，不同ECN的甘油三酯得到很好地分离，因此，在甲醇流动相条件下，固定相与甘油三酯之间主要表现为双键与双键之间的络合作用，可以实现不同双键数甘油三酯的分离；在乙腈流动相条件下，固定相与甘油三酯之间主要表现为疏水相互作用，可以实现不同当量碳数甘油三酯的分离；b、优化条件建立离线单柱二维分离的方法，分为两步，第一步先在流动相乙腈条件下分离,采用等度洗脱，一维流动相为：乙腈100％v，根据保留时间将峰分为不同的组，将各个组的峰分别收集，氮气吹干后用甲醇重新定容；第二步：在含0.2％(v/v)氨水的甲醇：异丙醇＝93:7(v/v)下进行第二次分离，流速1mL/min，该条件下可以实现甘油三酯标准品先按ECN分离，相同ECN的标准品再按双键数进行分离；2)食用油中甘油三酯的定量方法：(1)将饱和单脂肪酸甘油三酯和不饱和单脂肪酸甘油三酯标准品分别用异丙醇配成1mg/mL的贮存溶液，然后用相同的溶剂将饱和单脂肪酸甘油三酯稀释到10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，500ng/mL，1000ng/mL，5000ng/mL，不饱和单脂肪酸甘油三酯稀释到10ng/mL，100ng/mL，500ng/mL，1000ng/mL，5000ng/mL，10000ng/mL,在第二维流动相条件下，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线；所述在第二维流动相条件下为，含0.2％(v/v)氨水的甲醇：异丙醇＝93:7(v/v)；(2)以甘油三酯OOO为基准，将其响应因子设为1，其它单脂肪酸甘油三酯的RF利用其标准曲线的斜率比a<sub>ooo</sub>/a<sub>TAG</sub>计算得到；(3)混合脂肪酸甘油三酯的RF采用算数平均法计算得到，RF<sub>PPO</sub>＝(2*RF<sub>PPP</sub>+RF<sub>OOO</sub>)/3；其中，RF<sub>PPO</sub>表示甘油三酯PPO的响应因子，RF<sub>PPP</sub>表示甘油三酯PPP的响应因子，RF<sub>OOO</sub>表示甘油三酯OOO的响应因子；(4)对已定性的食用油中甘油三酯，采用多反应监测‑增强产物离子扫描，选定甘油三酯的特征离子对，算出其峰面积，利用RF对峰面积进行校正后，得到甘油三酯的含量；(5)对定量模型进行验证，包括混合脂肪酸甘油三脂RF的实测值和计算值的比较验证计算模型的准确性，及HPLC‑MS测得的甘油三酯的定量结果折算成脂肪酸后的结果和GC‑FID测得的脂肪酸的结果的比较，验证甘油三酯定量的准确性。 |
