检测空肠弯曲菌喹诺酮类抗生素耐药突变位点的方法

摘要

本发明公开了检测空肠弯曲菌喹诺酮类抗生素耐药突变位点的方法。该方法包括:以gyrA基因编码序列的第257位是C的空肠弯曲菌作为野生型标准菌株，以gyrA基因编码序列的第257位是T的空肠弯曲菌作为突变型标准菌株，与待测空肠弯曲菌分别同时进行高分辨率熔解曲线分析；根据高分辨率熔解曲线的比较结果确定待测空肠弯曲菌gyrA基因编码序列的第257位是C还是T：如待测空肠弯曲菌的高分辨率熔解曲线与野生型标准菌株的一致，待测空肠弯曲菌候选为gyrA基因编码序列的第257位是C的菌株，如待测空肠弯曲菌的高分辨率熔解曲线与突变型标准菌株的一致，待测空肠弯曲菌候选为gyrA基因编码序列的第257位是T的菌株。

主权项

非疾病诊断和治疗的辅助检测或检测空肠弯曲菌gyrA基因编码序列的第257位是C还是T的方法，包括:以gyrA基因编码序列的第257位是C的空肠弯曲菌作为野生型标准菌株，以gyrA基因编码序列的第257位是T的空肠弯曲菌作为突变型标准菌株，与待测空肠弯曲菌分别同时进行高分辨率熔解曲线分析，所述野生型标准菌株的高分辨率熔解曲线分析、所述突变型标准菌株的高分辨率熔解曲线分析和所述待测空肠弯曲菌的高分辨率熔解曲线分析中除PCR扩增的模板为各自的基因组DNA外，其它分析条件均相同；将待测空肠弯曲菌的高分辨率熔解曲线与野生型标准菌株的高分辨率熔解曲线和突变型标准菌株的高分辨率熔解曲线进行比较，根据比较结果确定待测空肠弯曲菌gyrA基因编码序列的第257位是C还是T：如果所述待测空肠弯曲菌的高分辨率熔解曲线与所述野生型标准菌株的高分辨率熔解曲线一致，所述待测空肠弯曲菌候选为gyrA基因编码序列的第257位是C的菌株，如果所述待测空肠弯曲菌的高分辨率熔解曲线与所述突变型标准菌株的高分辨率熔解曲线一致，所述待测空肠弯曲菌候选为gyrA基因编码序列的第257位是T的菌株；所述野生型标准菌株的gyrA基因的第495‑625位核苷酸与SEQ ID No.3的第495‑625位相同，所述突变型标准菌株的gyrA基因的第495‑625位核苷酸除第543位为T外，其它与SEQ ID No.3的第495‑625位相同；所述高分辨率熔解曲线分析包括PCR扩增，所述PCR扩增采用的扩增引物对满足如下条件：扩增的目的DNA片段长度为100‑250bp且包括空肠弯曲菌gyrA基因编码序列的第257位；所述PCR扩增采用的反应体系中的镁离子浓度为2.0mM；所述PCR扩增采用的扩增引物对是PgyrA131，PgyrA131由上游引物和下游引物组成，所述上游引物是SEQ ID No.1所示的单链DNA，所述下游引物是SEQ ID No.2所示的单链DNA。