一种提取海洋微藻油体的蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种提取海洋微藻油体(lipid droplet,也被称为油珠、脂滴）及提取纯化油体相关蛋白方法。油体是多数海洋微藻贮存甘油酸三酯（triacylglyeerols,TAG）的主要亚细胞结构。其提取过程包括利用高压（French press1500-20000psi）、研磨/Beadsshocker、超声(3w-100w)或渗透压调节破碎微藻细胞；利用蔗糖梯度(1.0M、0.6M、0.4M、0.2M、0M)离心和高速或超高速（1,0000g-15,0000g）离心获得低密度油体层；收集后洗涤非特异性粘附油体膜上蛋白；利用氯仿：甲醇或丙酮沉淀油体上蛋白。

主权项

一种提取微藻油体的蛋白的方法，其特征在于： （1）利用高压、超声、研磨或高渗破碎藻细胞后，油体因其密度低与其它亚细胞器经超速离心后分离，油体浮在所有水相梯度顶层，收集油层，洗涤，具体为分离缓冲液中加入0.6‑1.0M蔗糖，保护胞内细胞器，利用高弗式压碎器15000‑20000psi破碎微藻细胞，选择蔗糖梯度、离心速率或离心力，油体直径在0.5‑5um之间，收集顶层油体，洗涤； （2）将油脂和蛋白分离，用氯仿：甲醇（V/V1:2）或2‑4倍体积冷丙酮12‑20h,‑20℃处理油体，离心，收集油相和沉淀；0.1%SDS复溶沉淀蛋白，冻干，即可得到目的蛋白。