一种同时快速检测多种核酸的方法

摘要

本发明涉及生物样品的检测与鉴别，提供了一种同时快速检测多种核酸的方法。一种同时快速检测多种核酸的方法，包括步骤：A.利用与多种靶标核酸分别对应的引物，在同一反应体系中，对待测样品同时进行多种靶标核酸的LAMP扩增，得扩增产物；与每种靶标核酸对应的引物中的至少一条带有标记物，各靶标核酸对应的引物所带的标记物不同；B.对扩增产物所携带的标记物进行检测，并根据标记物的检测结果判定待测样品中所含有的靶标核酸的种类。本发明通过LAMP技术在同一反应体系中同时快速检测多种靶标核酸，利用靶标核酸与引物及引物上所带标记物一一对应的关系，检测扩增产物并进行判断，实现准确区分待测样品中含有哪几种靶标核酸的目的。

主权项

一种用于非疾病诊断治疗目的的同时快速检测多种核酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：A’.对待测样品进行处理，得到待测靶标核酸处理液；A.利用与多种靶标核酸分别对应的引物组，在同一反应体系中，对待测样品同时进行多种靶标核酸的LAMP扩增，得扩增产物；与每种靶标核酸对应的引物组中的至少一条引物带有标记物，各靶标核酸对应的引物组所带的标记物不同；所述标记物为荧光标记物；B.采用光谱分离法对扩增产物所携带的标记物进行检测，并根据标记物的检测结果判定待测样品中所含有的靶标核酸的种类；所述多种靶标核酸是指待测样品中所包含的多种待测核酸；所述待测样品为食源性致病菌和/或病毒；所述待测样品包括志贺氏菌和沙门氏菌；所述多种靶标核酸包括沙门氏菌invA基因、志贺氏菌ipaH基因和金黄色葡萄球菌clfA基因；所述光谱分离法，是利用所使用的荧光标记物不同，其激发/发射光谱不同，通过多色分光仪分离它们的光谱检测荧光信号，然后根据检测得到的荧光信号判断扩增产物的种类，进而判断对应的靶标核酸的种类；所述与沙门氏菌invA基因对应的引物组的核苷酸序列分别为：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:4；所述与志贺氏菌ipaH基因对应的引物组的核苷酸序列分别为：SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:8；所述与金黄色葡萄球菌clfA基因对应的引物组的核苷酸序列分别为：SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:12；所述标记物为‑CY3、‑FITC和‑Texas Red，它们通过中间偶联剂亚磷酰胺试剂分别标记于SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19的5’端；针对志贺氏菌和沙门氏菌，所述步骤A’具体为：首先对样品在37℃进行常规液体培养12h至浑浊，取菌液1mL，12000rpm离心5min，然后以1×TE缓冲液洗涤重悬，再次12000rpm离心5min，沉淀加入200μL ddH₂O重悬混匀，沸水浴12min，然后冰浴5min，12000rpm离心5min，取上清作为待测靶标核酸处理液。