主权项 |
一种半夏组织培养快繁方法,其特征在于包括以下步骤:(1)外植体消毒:半夏块茎先用洗洁精水溶液浸泡10~50min,用手剥去表皮后用自来水冲洗1~3h,擦干表面水分后在超净工作台中以70%~80%乙醇浸泡5~10s,0.1%升汞溶液消毒8~20min,再用无菌水清洗3~5次后无菌滤纸擦干后备用;(2)愈伤组织诱导:将步骤(1)处理后的块茎切成0.5cm×0.5cm×0.5cm的立方体接种诱导培养基上进行愈伤组织诱导,接种后置于每天光照12~15小时,光照强度为1000~1500lx,培养温度为25~28℃的条件下培养直至形成愈伤组织;(3)增殖培养:将步骤(2)形成的愈伤组织转接于增殖培养基中进行继代培养,接种后先在25~28℃条件下全暗培养3~7天,然后置于每天光照10~12小时,光照强度为2000~2500lx,培养温度为25~28℃的条件下培养,20~25天转接一次;(4)分化培养:将步骤(1)或(2)形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽诱导培养,接种后先在25~28℃条件下全暗培养3~7天,然后置于每天光照10~12小时,光照强度为2000~2500lx,培养温度为25~28℃的条件下培养直至形成不定芽和不定根;(5)炼苗移栽:待幼苗长至健壮后置于自然光照下炼苗5~7天后,洗净根部培养基,移栽由营养土:沙土=2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养,每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水,保持湿度,待幼苗成活后再移栽大田。 |