一种茶树组织培养再生体系构建方法

摘要

本发明公开了一种茶树组织培养再生体系构建方法，涉及茶（Camellia sinensis L.）通过无性快繁技术获得株性稳定茶树种苗的技术方法。本发明以茶树未成熟胚为外植体，经过种子消毒、胚愈伤组织诱导、分化培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤构建了茶树组织培养再生体系，既解决茶树优质种苗缺乏的问题，又可为今后开展茶树遗传转化工作奠定基础。

主权项

一种茶树组织培养再生体系构建方法，其特征在于包括以下步骤： （1）种子消毒：选择8月份底未成熟茶果，去叶后于洗衣粉水浸泡10～30min，刷净后自来水冲洗1～2h，取出尚未成熟的乳白或略带棕色的种子，在超净工作台中，剥开外种皮，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次后备用； （2）胚愈伤组织诱导：将经步骤（1）处理后未成熟种胚切成0.5cm×0.5cm×0.5cm接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养30～45天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成胚性愈伤组织； （3）分化培养：将步骤（2）培养获得的呈绿色的子叶愈伤组织转入分化培养基上进行分化培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为3000～5000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽； （4）生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为2.5～3.5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根； （5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约6～8cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。