一种胚胎干细胞定向诱导分化为肝细胞的方法

摘要

本发明提供了一种高效的将人胚胎干细胞诱导分化为肝细胞的方法。该方法以肿瘤抑制因子P53及Wnt5a重组蛋白作为分化诱导剂，在分化培养初期采用低氧培养，之后在细胞发育不同时期添加包括甲胎蛋白（AFT）、胰岛素等在内的肝细胞生长因子促进诱导分化。本发明也提供了由所述方法获得的肝细胞，这些从人胚胎干细胞起源的肝细胞具有正常肝细胞的形态和亚细胞结构如毛细胆管等，表达肝细胞特异的蛋白质，如甲胎蛋白（AFP）、白蛋白（ALB）、细胞角蛋白18（CK18），而且还具有肝脏特异的糖原储存功能。

主权项

一种胚胎干细胞定向诱导分化为肝细胞的方法，其特征在于，将胚胎干细胞用培养瓶摇动培养出EB，EB经消化成单细胞后接种诱导培养，分化培养第一天采用低氧条件（4% O₂）预培养，并以肿瘤抑制因子P53及Wnt5a重组蛋白组合作为分化诱导剂，在细胞发育不同时期添加包括甲胎蛋白、胰岛素等在内的肝细胞生长因子，通过体外培养实现的。