一种鉴定造血干细胞移植术效果的试剂盒

摘要

本发明公开了一种鉴定造血干细胞移植术效果的试剂盒。本发明提供的试剂盒，包括组件A、B、C、D、E、F、G和H；组件A为用于制备骨髓单个核细胞的物质；组件B为用于培养骨髓间充质干细胞形成集落的物质；组件C为用于对骨髓间充质干细胞集落进行计数的物质；组件D为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有分化成成骨细胞的能力的物质；组件E为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有分化成成脂肪细胞的能力的物质；组件F为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有抑制T淋巴细胞增殖的能力的物质；组件G为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有作为造血干细胞的饲养细胞的能力的物质。本发明提供的试剂盒操作简单、方便实用，可以检测造血干细胞移植术后骨髓造血微环境恢复情况，为间充质干细胞的研究应用奠定了基础。

主权项

一种鉴定造血干细胞移植术效果的试剂盒，包括组件A、组件B、组件C、组件D、组件E、组件F、组件G和组件H；所述组件A为用于制备骨髓单个核细胞的物质；所述组件B为用于培养骨髓间充质干细胞形成集落的物质；所述组件C为用于对骨髓间充质干细胞集落进行计数的物质；所述组件D为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有分化成成骨细胞的能力的物质；所述组件E为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有分化成成脂肪细胞的能力的物质；所述组件F为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有抑制T淋巴细胞增殖的能力的物质；所述组件G为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有作为造血干细胞的饲养细胞的能力的物质；所述组件H为记载有如下判断标准的载体：如果满足如下（1）至（5），造血干细胞移植术后骨髓微环境重建成功：（1）患者进行造血干细胞移植术后9个月的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞数量与该患者进行造血干细胞移植术的预处理前的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞数量没有显著差异；（2）患者进行造血干细胞移植术后6个月的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞具有分化成成骨细胞的能力；（3）患者进行造血干细胞移植术后6个月的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞具有分化成成脂肪细胞的能力；（4）患者进行造血干细胞移植术后6个月的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞具有抑制T淋巴细胞增殖的能力；（5）患者进行造血干细胞移植术后6个月的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞具有作为造血干细胞的饲养细胞的能力；所述组件A为人淋巴细胞分离液或所述组件A包括人淋巴细胞分离液；所述组件B为含5‑20%体积份胎牛血清的低糖DMEM培养基或所述组件B包括含5‑20%体积份胎牛血清的低糖DMEM培养基；所述组件C为结晶紫或所述组件C包括结晶紫；所述组件D包括成骨分化诱导液和碱性磷酸酶染色试剂；所述组件E包括成脂肪分化诱导液和油红O；所述组件F包括离体的人 CD3⁺ T 淋巴细胞和CFSE；所述组件G包括离体的人 CD34⁺ 造血干细胞、含5‑20%体积份胎牛血清的低糖DMEM培养基和造血干细胞集落专用培养基；所述成骨分化诱导液为：含50μM抗坏血酸磷酸盐、0.1μM地塞米松、10mMβ‑磷酸甘油和5‑20%体积份胎牛血清的低糖DMEM培养基；所述成脂肪分化诱导液为：含1μM地塞米松、10μg/ml胰岛素和5‑20%体积份胎牛血清的低糖DMEM培养基。