| 主权项 |
一种菜薹小孢子离体培养方法，其特征在于包括以下步骤： （1）花蕾采集及预处理：从菜薹现蕾开始，于上午8:00以前采摘符合要求的花蕾放入自封袋并装入冰袋带回室内后，摘去已经开放或花萼开裂的花蕾，其余装入玻璃瓶中置于2～4℃条件下进行低温预处理1～5天后,经低温处理后去除过大和过小的以及表面有损伤开裂的花蕾，只保留2.0～3.0mm左右的花蕾； （2）胚状体诱导：将步骤（1）处理后的花蕾先70%～80%乙醇浸泡5～10s，0.1%升汞溶液消毒8～20min，再用无菌水清洗3～5次后置于无菌滤纸上用已消毒的镊子和解剖针剖开花蕾，切去花丝，将一定量的花药并接种于胚诱导培养基上进行胚状体诱导,接种后置于30～38℃恒温培养箱中热暗培养12～48小时后转至25～28℃的条件下继续暗培养直至形成胚状体； （3）分化培养：当步骤（2）形成的胚状体生长至子叶期后置于光照强度为200～500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养1～5天，待胚状体转绿后转接于分化培养基中进行分化培养,接种置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成较多丛生芽；（4）生根培养：将步骤（3）所获得的高度约为1～2cm的丛生芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；（5）炼苗移栽：待幼苗长至几条短的白根后置于自然光照下炼苗5～7天后，洗净根部培养基，移栽由营养土：沙土＝4:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度,待幼苗成活后再移栽大田。 |
