发明名称 一种长叶点地梅组织培养快繁方法
摘要 本发明公开了一种长叶点地梅组织培养快繁方法,涉及长叶点地梅(<i>Androsace longifolia</i>)通过无性快繁技术快速获得大量种苗的方法。本发明以长叶点地梅种子为外植体,经过愈伤组织诱导、不定芽诱导、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立长叶点地梅组织培养快繁体系,为今后通过多倍体育种、转基因等方法培育出花大、色艳、观赏价值高的长叶点地梅新品种提供参考。
申请公布号 CN104686334A 申请公布日期 2015.06.10
申请号 CN201510085924.0 申请日期 2015.02.22
申请人 刘木娇 发明人 刘木娇
分类号 A01H4/00(2006.01)I 主分类号 A01H4/00(2006.01)I
代理机构 玉林市振盛专利商标代理事务所 45109 代理人 吴安仪
主权项 一种长叶点地梅组织培养快繁方法,其特征在于包括以下步骤: (1)种子萌发:将野外采集的野生长叶点地梅种子先用洗衣粉水冲洗1~3h,然后于超净工作台中,剥开外种皮,先用75%乙醇消毒5~30s后用无菌水洗3~5次,再用1~5%次氯酸钠溶液消毒10~25min,用无菌水冲洗4~6次后放于无菌培养皿,培养皿底层铺一层薄的脱脂棉,再在脱脂棉上覆盖滤纸后灭菌的滤纸上,加入适量无菌水,然后置于每天光照10~12小时,光照强度为1500~3000lx,直至种子萌发,期间定期向培养皿中加入适量无菌水,以保证脱脂棉和滤纸湿润; (2)愈伤组织诱导:将步骤(1)得到的刚萌发的高约1cm的实生苗下胚轴切下并接种到诱导培养基上,先在25~28℃条件下全暗培养30~45天,然后置于每天光照10~12小时,光照强度为1500~3000lx,直至诱导形成胚性愈伤组织; (3)分化培养:将步骤(2)培养获得的呈绿色的子叶愈伤组织切成0.5cm<sup>3</sup>大小的小块转入分化培养基上进行分化培养,接种后先在25~28℃条件下全暗培养7~14天,然后置于每天光照12~16小时,光照强度为3000~5000lx,置于培养温度为25~28℃的条件下培养直至形成不定芽; (4)生根培养:将步骤(3)过程获得的高度约为2.5~3.5cm的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养,接种后先在25~28℃条件下全暗培养7~14天,然后置于每天光照14~16小时,光照强度为2000~3000lx,培养温度为25~28℃的条件下培养至生根; (5)炼苗移栽:将步骤(4)获得的高约6~8cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5~7天后,将试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,栽入由营养土:沙土=2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养,每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水,保持湿度,待幼苗成活后再移栽大田。
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