RNA和DNA双外参以及DNA内参实时定量荧光PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种RNA和DNA双外参以及DNA内参实时定量荧光PCR检测方法，包括步骤：选定外参基因和内参基因；制备外参基因mRNA与DNA的预混合液；收集样品及预混合液的总mRNA和DNA；实时定量荧光PCR，检测外参基因和待测基因的mRNA和DNA拷贝数以及内参基因DNA拷贝数，从而同时得到基因的表观表达水平、DNA拷贝数相对量以及细胞水平相对表达量，为基因样本检测及机理研究提供了多层次信息。

主权项

一种非诊断目的的RNA和DNA双外参以及DNA内参实时定量荧光PCR检测方法，同时检测待测基因的表观表达水平、DNA拷贝数相对量以及细胞水平相对表达量，其包括如下步骤：1)选定外参基因，配制外参基因mRNA与DNA的预混合液；所述外参基因为待测样品中不存在的序列；2)选定内参基因；其中，所述内参基因为不易发生拷贝数变异的CNV冷区的DNA区域；3)将步骤1)制备的所述预混合液与待测样品混合，分别抽提总mRNA和总DNA；4)总mRNA进行逆转录合成第一条cDNA链后与总DNA分别进行实时定量荧光PCR扩增，检测待测基因的mRNA和DNA的扩增产物的拷贝数、外参基因的mRNA和DNA的扩增产物的拷贝数，以及内参基因DNA扩增产物的拷贝数，根据如下公式计算同时检测得到待测基因的表观表达水平、DNA拷贝数相对量以及细胞水平相对表达量：待测基因的细胞水平相对表达量＝待测基因的表观表达水平×待测基因的DNA拷贝数相对量。