一种块体大孔材料固定化漆酶的制备方法

摘要

本发明涉及一种块体大孔材料固定化漆酶的制备方法，属于固定化酶制备技术领域。该固定化漆酶是以表面环氧基功能化的块体SiO₂大孔材料为载体，将漆酶通过共价结合法固定在该载体上。其制备方法包括两个步骤：载体的制备和漆酶的固定。载体的制备：以γ-(2，3环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷(GPTMS)为硅烷偶联剂，在溶剂热反应条件下通过GPTMS在SiO₂大孔材料孔道内表面接枝反应，制备出可与漆酶共价结合的环氧基功能化载体。漆酶的固定：将载体浸入漆酶溶液，在室温下振荡反应，经洗涤、干燥，得固定化漆酶成品。本发明提供了一种新型固定化漆酶，具有制备工艺简单，成本低廉，固定化漆酶活力高等特点。

主权项

一种块体大孔材料固定化漆酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)载体的制备：采用溶剂热方法，在压力反应釜聚四氟乙烯内衬中按体积比1：1～10加入γ‑(2，3‑环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷(GPTMS)和有机溶剂，称取适量干燥的块体SiO₂大孔材料浸入上述GPTMS的溶液中，在60～150℃下反应6～24小时，自然冷却后，滤出大孔材料，用相应的有机溶剂冲洗2～3次、再用去离子水反复冲洗，干燥后即得固定化酶所用的载体；(2)漆酶的固定：将步骤(1)中得到的载体浸入用缓冲溶液配置的漆酶溶液中，在5～30℃下振荡反应3～5小时，滤出、用缓冲液洗涤至溶液中检测不到蛋白，然后真空干燥即得固定化漆酶成品。