基于RNA和DNA双外参实时定量PCR的表达校准值的检测方法

摘要

本发明公开了一种基于RNA和DNA双外参实时定量荧光PCR策略的基因表达校准值的检测方法，包括：选定外参基因；配制外参基因的RNA与DNA的预混合液；样品中加入预混合液，收集样品RNA和DNA；实时定量荧光PCR，检测待测基因和内参基因RNA拷贝数、内参基因DNA拷贝数以及外参基因RNA和DNA拷贝数，计算得到内参基因的表观表达水平后，再根据公式得到待测基因的表达校准值。本发明还公开了上述方法在PCR array以及表达谱芯片检测分析技术中的应用。本发明将基因的表观表达水平概念和检测方法与传统表达检测体系相结合，以更少的检测反应、更低廉的成本实现更精确的基因表达水平检测，修正由内参基因真实表达水平在不同样本间不恒定所造成的检测结果的不准确。

主权项

基于RNA和DNA双外参实时定量PCR的表达校准值的非诊断目的的检测方法，其特征在于，所述检测方法无需检测待测基因的DNA拷贝数，所述检测方法包括如下步骤：1)选定外参基因，配制外参基因的RNA与DNA的预混合液；2)将步骤1)制备的预混合液与待测样品混合，分别抽提总RNA和总DNA；3)总RNA进行逆转录合成第一条cDNA链；4)对cDNA组分和总DNA组分分别进行实时定量荧光PCR扩增，测定扩增后的待测基因的RNA扩增产物拷贝数、内参基因的RNA扩增产物拷贝数、内参基因的DNA扩增产物的拷贝数、以及外参基因的RNA和DNA扩增产物的拷贝数；根据如下公式计算得到内参基因的表观表达水平：根据上述内参基因的表观表达水平值，按如下公式计算得到待测基因的表达校准值：其中，所述方法减少检测反应的次数，实现基因表达水平检测。